几种常用特殊染色操作过程中的要点.doc

几种常用特殊染色操作要点 徐开军 云南省第三人民医院病理科 目前常用特殊染色包括几类： 一、病原微生物： 真菌（PAS、GMS）、抗酸杆菌（苯酚碱性品红）、幽门螺 杆菌（W-S、硼酸亚甲蓝、碱性品红）、乙肝病毒（地衣红、 维多利亚蓝） 二、结缔组织： 胶原纤维（VG、Masson）、网状纤维（氢氧化银氨法）、 弹力纤维（维多利亚蓝、醛品红品红）、 三、肌组织： 横纹肌（PTAH）、早期心肌病变（变色酸亮绿、HBFP） 2 四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O） 3 八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等 4 一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法） 5 （一）网状纤维的形态结构 ?较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状 （与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用） ?HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色 （嗜银性/嗜银纤维：黑色） ?主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白 （PAS染色：淡紫红色） 6 （二）网状纤维染色方法的选择 染色方法有十余种： （Gomori、Gordon-Sweet、James、Foot、改良Lillie） 不同点： 1.所用氧化剂/浓度（KMnO4/高碘酸；0.25%、0.5%）不同。 2.所用银氨液（氢氧化银氨、硝酸银氨、碳酸银氨等）不同。每 种银氨液都处于离子状态，离解成带正电荷的Ag（NH 3）2+ （二氨合银离子）和带有负电荷的NO 3COO-、OH-等。 -、CO 2-、CH 3 3 3.背景复染不同：VG复染、核固红、不复染。 7 （三）网状纤维染色原理 经氧化，网状纤维表面被覆糖蛋白中己糖毗邻的羟基转变为醛基，银 氨液（二氨合银离子Ag（NH 3）2+）被组织吸附后并与醛基结合，经甲醛 还原、水洗后剩余的银离子还原为黑色的金属银而沉淀。 1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。选择性 2.漂白（H 2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。 8 （四）染色化学试剂选择 1.高锰酸钾：强氧化剂，具腐蚀、刺激性。在酸性溶液（氧化力最强） 易分解（光有催化作用），在实验室用棕色瓶存放。 2.草酸：有毒性、腐蚀、刺激性及很强的还原性。（还原剂和漂白剂） 3.硫酸铁铵/铁明矾：易吸湿。对光敏感。在水中溶解缓慢。（媒染剂） 4.Gomori银氨/氢氧化银氨：硝酸银、氢氧化钾、氢氧化铵。（密封保存） ①硝酸银：氧化性较强。遇有机物（沾上皮肤）变灰黑色。常因纯度不 高被保存于棕色瓶。与部分有机物或硫、磷混合研磨、撞击可引起爆炸。 ②氢氧化钾：呈强碱性及具有腐蚀性。极易吸收空气中水分而潮解。 ③氢氧化铵：不稳定，易分解而生成氨和水。具有挥发性，应密封保存 在棕色瓶中。 9 （五）染液的配制及保存 ①0.25%高锰酸钾：（定期更换） ②2%草酸： ③2%硫酸铁铵： 棕色瓶 2-8°C冰箱保存 ④Gomori银氨液：（使用、保存几周） （染色成败的关键） ⑤4%中性甲醛：（定期更换） 10 Gomori银氨液-1 10%硝酸银(3ml)+10%氢氧化钾(1ml) 出现棕黑色颗粒沉淀 ＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） 反复/3次，沉淀不浑浊 留下沉淀及少许上清液（4ml） 保留沉淀物质 逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入） 边加摇晃 至沉淀逐渐完全溶解 无色溶液 逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 浑浊状态 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失 无色溶液 ＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱 棕色瓶、密封保存 11 Gomori银氨液-2 甲液：硝酸银(10.2g)+蒸馏水100ml 乙液：氢氧化钠（3.1g）+蒸馏水100ml 甲液（5ml）+乙液（5ml） 出现棕黑色颗粒沉淀 逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入） 边加摇晃 至沉淀逐渐完全溶解 无色溶液 补加＋氢氧化铵（4滴） ＋蒸馏水至50ml，2-8°C冰箱 棕色瓶、密封保存 12 染液配制中的注意事项 1.配制染液玻璃容器必须清洁干净，最好采用重铬酸钾清洁液浸 泡过夜，沥干洗液后再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2-3次。 2.高锰酸钾浓度不宜超过1%（氧化速