5细菌的生理生化反应.ppt

细 菌 的 生 理 生 化 反 应 生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别 一些在形态和其它方面不易区别的微生物。 ? 糖酵解试验 ? 过氧化氢酶试验 ? 淀粉水解试验 ? V-P 试验 ? 甲基红（ Methyl Red ）试验 ? 靛基质（ Imdole ）试验 ? 枸椽酸盐试验： ? 尿素酶（ Urease ）试验 ? 硝酸盐还原试验 ? 三糖铁（ TSI ）琼脂试验 ? 动力试验 API 系列 VITEK ? 全自动化微生物鉴定系统 原理 ：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产 气、或仅产酸。 培养基 ：含有 0.5% - 1% 的糖（醇、苷）的液体、半固体、 固体、或微量生化管。 方法 ： 纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周， 微量管注意保持湿润，以免干燥。 结果 ：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂 呈酸性反应。若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象 意义 ：肠杆菌科尤为重要 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气 作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加 入指示剂 溴甲酚紫 （即 B.C.P 指示剂，其 pH 在 5.2 以下呈黄 色， pH 在 6.8 以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变 化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置 杜氏小 管 观察。 [ 方法 ] ： 取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒 立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养 18 － 24 小时， 观察结果。 [ 结果 ] ： 1 、确定细菌是否生长 2 、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+” 表示。 3 、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气 泡，用“ ”表示。 4 、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“ - ” 表示。 大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 葡萄糖 + 乳糖 - - 葡萄糖： + - 麦芽糖： - + 甘露醇： + - 鼠李糖： - + 原理 ：细菌分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的， 称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄 糖的称为产碱型 培养基 ： HL 二氏培养基 方法 ：待测菌同时接种两只 HL 培养基，其中一只滴加无菌 的液体石蜡，高度不少于 1cm ，35℃培养 48h 或更长 结果 ：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅 不加石蜡的产酸为氧化型 意义 ：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的 鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型 原理 ：有的细菌可以产生 β 半乳糖苷酶，分解邻 - 硝基酚 - β 半乳糖苷生成黄色的邻 - 硝基酚 方法 ：从 KIA 上取菌，于 0.25ML 无菌生理盐水中制菌悬液， 加甲苯一滴，使酶释放。37 ℃水浴 5min, 加 0.25mlONPG 试剂， 水浴 20min-3h 观察结果 结果 ：呈现黄色为阳性，一般 20-30min 内显色 意义 ：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的 细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴 注意 ：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生 的酶及其活性 原理 ：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者 与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物， 使培养基呈黑色 方法 ：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果 结果 ：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义 ： D 群链球菌与其他链球菌的区别， 前者为阳性；肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌多 阳性 + - 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳 酸等，使培养基的 PH 降至 4.5 以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若 产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的 PH 仍在 6.2 以上，加入 甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基： 葡萄糖蛋白胨水 方法 ：待测菌接种于培养基， 2-4 天后， 加入甲基红试剂，观察结果 结果 ：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳 性，黄色为阴性 意义 ：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸 杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性 甲 基 红 试 验 阳性 阴性 对照 大肠杆菌： + 产气杆菌： — 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙