细菌耐药性检测.pptVIP

细菌遗传变异 ESBLs 总阳性率为 40.3% ，以重症监护病 房为最高（ 75.0% ）。产 ESBLs 菌对头孢他 啶、头孢噻肟、头孢曲松的耐药性高达 82.9% ～ 100.0% ，较不产 ESBLs 菌高 77.0% ～ 94.0% 。对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、 磺胺类的交叉耐药性最高分别达到 96.3% 、 85.2% 、 92.6% ，所有受试菌对亚胺培南均敏 感。大肠埃希菌对阿米卡星耐药率较肺炎克 雷伯菌低。 细菌遗传变异 AmpC ? - 内酰胺酶 与 ESBLs 在结构上不同 能水解第三代头孢菌素 可水解头霉素类 ( 如头孢西丁、头孢替坦、 头孢美唑 ) 细菌遗传变异 产 AmpC 酶菌株的药敏试验特点 产生菌：肠杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属、弗 劳地枸橼酸杆菌、沙雷菌属和绿脓杆菌 对头霉素类、第三代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂 耐药、同时对喹诺酮类和氨基糖苷类耐药 对第四代头孢菌素头孢吡肟和碳青霉烯类敏感 如为 ESBLs+AmpC 酶株第四代头孢菌素亦耐药 细菌遗传变异 碳青酶烯水解酶 能够水解亚胺培南或美罗培南等碳青霉烯 类抗菌药物的 β - 内酰胺酶 有 3 类： A 类获得性碳青霉烯水解酶（ 2f 群） OXA 23-27 金属酶 细菌遗传变异 产碳青霉烯酶菌株的药敏试验特点 产生菌：铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、部 分肠杆菌科细菌 可水解各种广谱β - 内酰胺类抗生素包括第 三代、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂， 头霉素类、碳青霉烯类等 多为泛耐药菌株，并同时对喹诺酮类和氨基 糖苷类耐药。 细菌遗传变异 肠杆菌科细菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变 形杆菌中凡 ESBLs 产生菌株 增加了对碳青霉烯酶的检测的要求 肠杆菌科细菌如产生碳青霉烯酶，即使体外敏感，也 可能临床使用碳青霉烯类治疗时失败。 细菌遗传变异 KPC( 肺克 ) 碳青霉烯酶 可水解碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素 类和氨曲南等抗生素，能被克拉维酸抑制 1966 年首先在美国北卡罗来纳的肺炎克雷 伯菌中发现 KPC-1 、此后在世界各国相继发 现 KPC-2-4 ，幷涉及沙门菌、产酸克雷伯菌、 阴沟、产气及其他肠杆菌科细菌 细菌遗传变异 耐药细菌及酶类的检测 β - 内酰胺酶的检测 MRSA 的检测 耐青霉素肺炎球菌的检测 VISA 与 VRSA 的检测 如何检测 KPC 酶 细菌遗传变异 β - 内酰胺酶的检测 头孢硝噻吩法 原理：头孢硝噻吩的β - 内酰胺环受β - 内酰 胺酶的作用开环后，产生由黄色向红色转变 的颜色反应，即为产酶菌株。 方法： 1. 用滴管吸取头孢硝噻吩液 1 滴直接置于测试菌 的菌落上，观察菌落及周围培养基颜色变化， 产生红色者即为产酶阳性。 2. 纸片法：用 1 滴无菌水将头孢硝噻吩纸片湿 润，把测试菌直接涂于经湿润后的头孢硝噻 吩纸片，即可观察其颜色反应，产生红色者 为产酶阳性。 细菌遗传变异 头孢硝噻吩法 测定菌 ： 葡萄球菌、肠球菌、嗜血杆 菌属、淋病奈瑟菌属、卡他莫拉菌属 产生β - 内酰胺酶 特点：简便、快速、灵敏，但价格相 对较昂贵。 细菌遗传变异 纸片法 细菌遗传变异 ESBL 确证试验 1. 纸片扩散法 将 CAZ 、 CD02( 头孢他啶 / 克拉维酸 ) ， CTX 、 CD03( 头孢噻肟 / 克拉维酸 ) 两组纸片对细菌进 行药敏试验，当 CD02 或 CD03 任意复方制剂的 抑菌圈直径与相应单药抑菌圈直径相差 ≥ 5mm ， 即可判断该菌产 ESBL 原理：因细菌产生的 ESBL 活性被 CD02 或 CD03 中的 克拉维酸所抑制， CAZ 或 CTX 可恢复抗菌活性 细菌遗传变异 细菌遗传变异 2.MIC 测定 ⑴ . 稀释法 菌液配置： 肉汤稀释法菌液稀释浓度为 10 5 CFU/ml 琼脂稀释法菌液浓度 10 4 CFU/ml 细菌遗传变异 细菌遗传变异 细菌遗传变异 细菌遗传变异 Etest 试条模板的应用 Etest 试条放置琼脂表面时有 MIC 刻度面须朝上， 勿将试条倒置，一旦放下，切勿再移动试条。 放置时试条柄端（标有字母 E ）应尽可能靠近平皿边 缘。 如果不小心将试条刻度面朝下即 MIC 刻度面与琼脂 贴合，则从柄端提起试条反转过来再贴在琼脂上， 使刻度面朝上。 细菌遗传变异 Etest 试条模板的应用 作苛养菌或极敏感菌株药敏时， 150mm 平皿上只能 放置 4 ~ 5 个试条， 90mm 平皿只放 1 个试条。 将试条放置平板上的方法有用镊子， Etest 加样器或 真空笔。 如果试条放到非正常位置，勿移动试条，维持原状判 读结果。 细菌遗传变异 细菌遗传变异 4.MIC-- 自动仪器 5. 分子生物学试验 细菌