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2010-03 * 工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 中国食品发酵工业科学研究所 抗生素菌种保藏管理中心(CACC) 中国医学科学院医用生物技术研究所 四川抗生素研究所 华北制药厂抗生素研究所 兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC) 农业部兽医药品监察所 林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC) 中国林业科学院 专利微生物菌种保藏管理中心(ACCC) 武汉大学 2010-03 * 国外的菌种保藏机构 世界菌种保藏联合会(WFCC) 美国标准菌种收藏所(ATCC) 美国农业部北部地区研究实验室(NRRL) 英国 国立标准菌种收藏所(NCTC) 英国 国际真菌研究所(CMI) 荷兰真菌中心保藏所(CBS) 日本微生物菌种保藏联合会(JFCC) 2010-03 * 标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株—从国内、外菌种收藏机构获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后,既为标准储备菌株。 2010-03 * 菌种的保存 低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖,因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 不同的微生物,应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法。 2010-03 * 菌种 培养基 保存温度 传接时间 细菌 一般为营养琼脂斜面培养基,或根据菌种规定选用培养基 4~6℃ 芽孢菌3~6个月,其他细菌1个月 酵母菌 霉菌琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂斜面培养基 4~6℃ 一般3~6个月 真菌 PDA琼脂或改良马丁琼脂斜面培养基 4~6℃ 一般3~6个月 琼脂斜面低温保藏法 2010-03 * 菌种 保存液(2mL) 保存温度 保存时间 金黄色葡萄球菌 营养肉汤 1%蛋白胨甘油水? 10%~40%甘油 -30~ -80℃ 半年以上 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌 胆盐乳糖增菌液 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单孢杆菌 生孢梭菌 疱肉培养基 白色念珠菌 ?改良马丁培养基 黑曲霉 液体冷冻保藏法 2010-03 * 菌种的传代和使用 工作菌种的传代次数应严格控制,不得超过5代,(从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代)防止过度的传代造成菌种变异。1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中,任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要时,实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。 2010-03 * 冻干菌种(0代) ↓ 适宜的增菌液约5mL溶解苏醒(1代) ↓ 增菌液培养复壮(2代) ↓ 增菌液培养 → → 分装冷冻保存 适宜的斜面培养基 → 使用 划线传代(3代) ↓ 适宜的斜面培养基 划线传代(4代) → 使用→ 分装冷冻保存 ↓ 适宜的斜面培养基 划线传代(5代) → 使用→ 分装冷冻保存 2010-03 * 经过长期保藏和传代的菌种,由于种种原因发生衰退、变异和死亡。因此菌种在保藏期间必须定期检查,发现变异或衰退,应及时给予恢复。 每隔一定时间间隔需对菌种重新复活、分离、纯化、检查鉴定和再保藏。主要检查菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形态、生化特性及血清学检查。 2010-03 * 菌种的管理 1、使用菌种的单位,应具备从事微生物工作 的条件和设备。 菌种应由专人负责管理,管理人员应具有微生物专业知识和技术水平,并应具有较强的责任心。 2、实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理制度; 包括:每支菌种标注名称、标准号、接种日期、传代次数、进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁的记录、标准菌种的申购记录、从标准菌株到工作菌株操作记录,如菌种定期转种传代,鉴定(纯度、特性)、培养基和培养条件、菌种保存的位置和条件及其它需要的程序。 2010-03 * 3、菌种应冷藏或冷冻保存,保存菌种的冰箱不得放置食品和易挥发性药品,放置菌种应有专用的冰箱,应上锁管理。 4、由专人按操作规程
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