动脉粥样硬化课件模板-062(共63).pptVIP

* 《动脉粥样硬化》 课件模板-62 《动脉粥样硬化》：五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌 五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌： 1。感受态细胞的制备 （1）将1ml过夜培养的细菌（如DH52、TG1、TM101）接种于100ml2×YT培养于500ml烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约OD550=0.2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。 （2）将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。 《动脉粥样硬化》：五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌 五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌： （3）弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mMCaCl2和10mmTris·HCl（pH8.0）无菌冷冻液体中。 （4）将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。 （5）弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mMCaCl和10mMTris·HCl（pH8.0）无菌冷冻中。 《动脉粥样硬化》：五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌 五、M13噬菌体重组DNA分子导入大肠杆菌： 此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。 2。转化程序 （1）取出200μl感