4%多聚甲醛的配制.pdfVIP

学 海 无 涯 4%多聚甲醛的配制: 0.1M PBS 配制 80g NaCl 2g KCl 14.4g Na2HPO4 2.7g KH2PO4 溶于800ml 蒸馏水中，用HCl 调节溶液的pH 值至7.4，最后加蒸馏 水定容至1L 即可。 在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少 20 分钟），保存 存于室温或 4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将 4 克多聚甲 醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打 开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl 调节溶液的pH 值至7.4,使用前 新鲜配制. 4%多聚甲醛固定液： 用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液 灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24 小时）也常选该固定液固定。 试剂： 多聚甲醛 40g PBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。 注固定时间24 小时。 我们实验室一直沿用的4 ％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是： 多聚甲醛（粉末状）：40g 磷酸二氢钠：2.965g 磷酸氢二钠：29g 蒸馏水：1000ml 学 海 无 涯 然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24 小时。 原来一直用的挺好，配出来也很清亮。 但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。等不 再加热，室温后，溶液就混浊了。再加热到 60 度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。 不知 道为啥？请高手指点一二，不胜感激 4 ％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和 氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般 15 到20 分钟就可以,大概放置 20 分钟后再加二氢钠, 溶解后,调PH 直到7.2 左右即可,最后别忘记放DEPC. 其实武汉博士德就有4 ％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC, 有毒而且易挥发,还带香味, 闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要 的,他们专业点,东西好用! 你要考虑以下几过因素: 1.蒸馏水洁净. 2.三角烧瓶洁净. 3.试剂没问题. 多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37 度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌 棒转一上午都不行，放在一边过几天再看就溶解了。 如果要求中性多聚甲醛就用pbs 或者用磷酸氢二钠+二氢钠，如果不要求中性用水就可以啦 我要做免疫组化实验。用ABC 法，DAB 显色。 组织的固定液，查外文资料用的都是4 ％多聚甲醛／0.1M PBS。但是实验室的老师说，是用0.01M 的PBS 配制，不知道是不是一样的？ 还有就是冲洗液，我查的英文资料都是用0.1M PBS。但是实验室老师说是0.01M PBS。 不知道大家对这个又没有经验。 固定用0.1M PBS，冲洗用0.01M PBS pbs 0.1M 的PBS Nacl 8.5 克 Na2HPO4.12H2O 30.8 克 NaH2PO4.2H2O 2.8 克 双蒸水 定容至1000ml 0.1M PBS 缓冲液的配制： Nacl: 4g Kcl: 0.1g Na2HPO4.12H2O: 1.445g KH2PO4l: 0.1g 用500ml 去离子水溶解，5.6%NaCO3 调PH 至7.2 左右 如果只单纯看看HE 的话时间倒无所谓，但如果实验还要做免疫组化、原位杂交等，那么最好不 要超过24 小时，否则就等着 吧，哈哈。