动物组织DNA的提取.pptVIP

Total DNA extraction from eukaryotic tissue 讲解人：蔡婷芳 实验目的 了解动物DNA的成分 掌握DNA提取的原理和操作过程 DNA提取原则 保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染 实验试剂和仪器 0.14 mol/L NaCl 1mol/L NaCl溶液 0.015 mol/L柠檬酸钠溶液 氯仿-异戊醇 95%乙醇 仪器：电子天平 玻璃棒 离心管 离心机 吸量管 试管 研钵 实验原理 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14 mol/L 氯化钠中溶解度低，但在 1 – 2 mol/L氯化钠中溶解度高；RNA核蛋白在0.14 mol/L氯化钠中仍有相当大的溶解度。所以调节氯化钠浓度，可使RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取。 氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可使DNA析出。 氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层；异