单克隆抗体制备流程图.pdfVIP

. . . . 单抗制备流程 1975 年 ，Kohler 和 Milstein 发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小 鼠脾细胞进行融合 ，形成的杂交细胞既可产生抗体 ，又可无限增殖 ，从而创立 了单克隆抗体杂交瘤技术 。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开 创了新纪元 ，也为临床疾病的诊 、防、治提供了新的工具 。 制备单克隆抗体包括动物免疫 、细胞融合 、选择杂交瘤 、检测抗体 、杂交 瘤细胞的克隆化 、冻存以及单克隆抗体的大量生产 ，要经过几个月的一系列实 验步骤 ，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序 ，逐一介绍其实验方法 。 一 、细胞融合前准备 (一 ) 免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功 ，获得高质量的 McAb 至关 重要 。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫 ，免疫方案应根 据抗原的特性不同而定 。 1.颗粒性抗原免疫性较强 ，不加佐剂就可获得很好的免疫效果 。下面以细 胞性抗原为例的免疫方案 : 资料整理 . . . . 初次免疫 1×10 ７／0.5ml ip ( 腹腔内注射 ) ↓ 2～3 周后 第二次免疫 1×10 ７／0.5ml ip ↓ 3 周后 加强免疫 (融合前三天 ) 1 ×10 ７／0.5ml ip 或 iv(静脉内注射 ) ↓ 取脾融合 2.可溶性抗原免疫原性弱 ，一般要加佐剂 ，常用佐剂 ：福氏完全佐剂 ，福 氏不完全佐剂 。要求抗原和佐剂等体积混合在一起 ，研磨成油包水的乳糜状 ， 放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态 。商品化福氏 完全佐剂在使用前须振摇 ，使沉淀的分枝杆菌充分混匀 。 初次免疫 Ag 1～50 μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射 │ (一般 0.8～1ml 0.2ml ／点) 资料整理 . . . . ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上 ，加福氏不完全佐剂皮下或 ip │ (ip 剂量不宜超过 0.5ml) ↓3 周后 第三次免疫 剂量同上 ，不加佐剂 ，ip │ (5～7 天后采血测其效价 ，检测免疫效果 ) ↓2 ～3 周后 加强免疫 ，剂量