动物细胞融合和单克隆抗体用 课件.pptVIP

2010-3-26 1 细胞融合和单克隆抗体 2010-3-26 2 ? 复习巩固： 1. 植物体细胞杂交 2. 植物组织培养 2010-3-26 3 植物体细胞杂交 植物细胞 A 植物细胞 B 原生质体 A 原生质体 B 原生质 体融合 杂种细胞 组织培养 杂种植株 去细胞壁 纤维素酶、 果胶酶 化学法 物理法 诱导 2010-3-26 4 1. 概念： 动物细胞融合（ cell fusion) ， 又 称体细胞杂交（ somatic hybridiazation ）， 是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成 一个细胞的过程。 一、动物细胞融合 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息 的单核细胞，称为杂交细胞。 2010-3-26 5 2 、动物细胞融合基本原理： 与植物原生质体融合的基本原理相同， 即细胞膜的流动性 3 、诱导方式 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激、振动、离心 聚乙二醇（ PEG ） 例如：仙台病毒 2010-3-26 6 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 生物法： 灭活的病毒 （丧失感染性、保留抗原结构） 2010-3-26 7 病毒促使细胞融合的主要步骤如下： 1. 两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近； 2. 通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透， 3. 胞质互相渗透； 4. 两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体； 5. 进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。 2010-3-26 8 4 、过程： 动物细胞 A 动物细胞 B 诱导，融合 2 个完整的杂交细胞 AB 有丝分裂 （膜融合、 诱导方法 质融合、 核融合） 单核细胞 2010-3-26 9 5 、动物细胞融合技术的发展简史告诉我 们： 科学技术是不断发展的 。那么，实 现动物细胞融合有什么 意义 呢？ ? 打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； ? 广泛应用多个学科领域； ? 重要用途： 制备单克隆抗体 。 2010-3-26 10 6 、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 制备单克隆抗体 获得 杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 去除细胞壁 后诱导 原生质体融合 使细胞分散后诱导 细胞融合 物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 2010-3-26 11 2 、什么是抗体？ 二、单克隆抗体 回顾 3 、抗体的分布？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原 发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 主要分布在血清中。 1 、什么是克隆？ “克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共 同祖先，通过 无性繁殖 的方法产生出来的一群 遗传特 性相同 的 DNA 分子，细胞或个体。在细胞水平指 动 物细胞培养 . 2010-3-26 12 由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形 成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生 的化学性质单一、特异性强的抗体。 1 、单克隆抗体概念 : 2010-3-26 13 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低 ， 且抗体的 特异性差、灵敏度低 。 ? 自主阅读 P52 ：抗体的传统生产方法 及缺陷是什么？ 思 考：如何大量获取某种特定抗体？ 2010-3-26 14 B 淋巴细胞特点： ３ . 每一个 B 淋巴细胞只能产生一种抗体。 １ .B 淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ２ . 动物体内的 B 淋巴细胞可以产生百万种以上 的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免 疫作用。 2010-3-26 15 怎样才能大量生产单克隆抗体？ 提示 1 ：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示 2 ：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 提示 3 ：有什么方法能使 B 细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？ 2010-3-26 1