2.2.2-动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

温故而知新——植物体细胞杂交（马铃薯番茄） 材料1: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 B淋巴细胞与抗体的关系： 补充：培养基的类型  分类依据 类型 营养物质来源 天然、合成、半合成 培养基物理状态 液体、固体、半液体 培养基的成分和用途 基本、完全、鉴别、选择 生产工艺的要求 孢子(Spore)、种子、发酵 按培养基的成分和用途 1、 选择性培养基 ：就是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 其功能是从混合菌样本中选取优势菌，从而提高该菌的筛选效率。 2、 鉴别性培养基 　 培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。 　　 * 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物细胞的融合 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 植物组织培养 原生质体B 原生质体A 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 动物细胞可以融合吗？ 如果可以，两者相同吗？ 2.2 动物细胞工程 一、动物细胞融合（细胞杂交） 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 4、诱导方法 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 动物细胞融合过程 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 膜融合、质融合 核融合 注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 多核细胞 核融合是动物细胞的融合成功的标志 6.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7.应用： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 动物细胞与植物细胞的差别： 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同： 不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 用途 诱导方法 细胞融合之前的处理 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 主要用于制备 单克隆抗体 1、抗体 1 .概念： 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 。 2. 来源： B淋巴细胞(浆细胞)。 １．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 ３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及 缺陷是什么？怎样解决这个问题？ 1 、单克隆 由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。 2 、单克隆抗体 由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，即单克隆抗体。 要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 3、杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，既能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克隆、筛选 体内培养 体外培养 B淋巴细胞 （选择培养基） （抗体检测） 细胞融合 杂交细胞 4、过程 从脾脏中获 取B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 产生所需抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 注射抗原 免 疫 筛选 (筛选) 思考：把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起融合时，有几种融合方式？ B-B融合细胞 杂交瘤细胞 瘤-瘤融合细胞 多孔动物细胞培养板 将含有杂交瘤细胞的培养液按比例稀释，分别加入多孔细胞培养板的小孔中，稀释度保证每个小孔