中药药理试验7.ppt

茵陈水煎液对小鼠急性肝损伤的影响 ——中药药理实验七 实验目的 了解保肝药物的研究方法。 观察茵陈水煎液对小鼠急性肝损伤的影响。 实验原理 四氯化碳（CCl4 ）肝损伤分急、慢性两种，CCl4 的肝毒性主要表现为血清中转氨酶活性增加，肝细胞脂质过氧化或坏死。 CCl4 进入机体后,经肝脏细胞色素P450 激活,生成三氯甲基自由基(·CCl3) 和三氯甲基过氧自由基(·OOCCl3) ，这两种自由基引起肝细胞的各种变化导致肝损伤。 实验原理 茵陈的有效成分：幼苗期的绿原酸， 花穗期的6，7-二甲氧基香豆素、茵陈色原酮。 茵陈可保护肝细胞膜、防止肝细胞坏死, 促进肝细胞再生及改善肝脏微循环。 实验动物 平均体重18～22g小鼠 实验药品 50g/l四氯化碳油溶液 茵陈水煎液1g/ml 生理盐水 ALT丙氨酸氨基转移酶试剂盒 实验器材 灌胃针头、手术剪、眼科镊、天平、烧杯、鼠台、离心机、水浴箱、分光光度计 实验方法 取18-22g小鼠9只，随机分为茵陈煎液组、模型对照组、生理盐水组，每组3只。茵陈煎液组第1、2、3天给茵陈煎液（0.1ml/10g）。第3天给药后茵陈煎液组、模型对照组给四氯化碳造模（0.1ml/10g） 。 第4天眼球取血，离心取血清，按试剂盒说明测ALT值。 解剖小鼠，观察各组小鼠肝脏的形态变化。 实验结果 实验结果 注意事项 分组规范 给药量计算准确 灌胃动作规范 正确处理实验数据 观察 实验报告要点 题目、姓名、专业、年级、班级、同组同学、年月日 目的、原理、材料（动物、药品、器材）、方法、结果、结论、讨论 思考题 茵陈保肝作用的有效成分及作用机制。 利用所学学科知识，分析实验结果。 丙氨酸氨基转移酶试剂盒使用说明书 原理： 在ALT的催化下，丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。 丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH吸光度下降的速率，即可计算出ALT活性。 操作步骤： 波长：340nm 温度：37 ℃ 比色杯光径：1cm 取一定量R2复溶1瓶R1，溶解后即为工作液。工作液预先保温指测试温度。 操作步骤： 混合均匀，在反应温度保温1分钟，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确1、3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度变化（⊿A/分）。 计算： ALT（U/L）=（⊿A样品/分—⊿A空白/分）×F ×5 F=1746 * * 茵陈煎液组 1 2 3 模型对照组 4 5 6 生理盐水组 7 8 9 组 别 1 2 3 10 11 12 ∑X茵 ∑X茵2 ∑X模 ∑X模2 ∑X生 ∑X生2 茵陈煎液组 模型对照组 生理盐水组 X茵 X茵2 X模 X模2 X生 X生2 工作液 1.00ml 1.00ml 蒸馏水 0.10ml —— 样 品 —— 20微升+80微升蒸馏水 空白管 样品管