氨基酸含量测定.pptVIP

氨基酸的定量分析 甲醛滴定法 、目的: 初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点 实验原理 水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱 滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—NH3结合 形成一NHCH2OH、一N(CH2OH)2等羟甲基衍生物 使NH3上的H游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3 放出H,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。 =:-t-c Coo+H+OH H,O NH3 lICIO NH-CH,OH n(CIL OIDx 若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致 滴定后结果偏低;酪氨酸含酚基结构,导致滴定结 果偏高。 三、材料、试剂与器具 (-)试剂 0.5%酚酞酒精溶 称0.5g盼酞溶于100ml50%酒精中 2、0.lmo/L甘氨酸溶液 取3.75g甘氨酸溶于50ml蒸馏水 标准0.0500moL氢氧化钠溶液 4、中性甲醛溶液 取甲醛溶液50ml,加0.5%酚酞指示剂约3ml,滴加0.0lmol/ NAoH溶液 使溶液呈微红色,临用前中和 (二)实验器具 锥形瓶、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平 容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯 四、操作步骤 1、取5只50m锥形瓶,按下表加入试剂 锥形瓶编号1