质粒DNA提取原理步骤凝胶电泳分析及其的应用.pptVIP

质粒DNA提取的原理、操作步骤、 琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 质粒DNA的提取 Extraction of Plasmid DNA 定义 质粒( Plasmid) 独立于细菌染色体外,能 独立自主复制的闭合环状 DNA分子; 质粒 细染色体 存在于细菌,放线菌,真 菌以及一些动植物细胞中 在细菌细胞中最多 ●质粒能自主复制,在细菌中不断复制自身。在细胞 内的复制分成两种类型:一种是低拷贝数的质粒, 每个细胞仅含有一个或几个质粒分子,这种类型称 为“严谨型”复制的质粒;另一种是高拷贝数的质 粒,拷贝数一般在20个以上,这种类型称为“松弛 型”复制的质粒 质粒能编码一些遗传性状,如抗药性(如抗氨苄青 霉素、抗四环素等),耐受重金属,产生细菌素等, 被质粒转化的细菌也获得了这些额外的特性 方法 ˇ碱裂解法 选择哪一种方法主要取决以下 煮沸裂解 几个因素 羟基磷灰石柱层析法质粒的大小 质粒DMA释放法 大肠杆菌菌株 酸酚法等 裂解后用于纯化的技术和实验要求