倒置荧光显微镜2 文档资料.ppt

倒置荧光显微镜操作 及注意事项 李玉红 显微镜部件及名称 显微镜机体 明视场 (BF) 镜检 关键点： 从光路中卸下其它形式观察需要的所有光学组件，聚光器调节好（调节聚焦 和对中），转动孔径光阑调节好像的清晰度。 1 ，复位 1 ） 逆时针转动，松开透射照明器中的 “ 聚光器再 聚焦指紧螺钉 ” 。 2 ） 把 “ 目镜筒转盘 ” 设置到＜ O ＞位。 3 ） 把显微镜右侧的 “ 中间放大倍数刻度盘 ” 打到 ＜ 1X ＞。 4 ） 逆时针转动，松开显微镜右侧粗 ∕ 微调旋钮后 面的 “ 物镜再聚焦定位环 ” 。 2. 打开透射照明器 1 ） 把电源后部的“外部开关”打到开的位置。 2 ） 把电源“电源开关”打开。（把开关拨至 │ ） 3 ） 按下显微镜左侧的“照明器开关”接通灯泡。 3. 调节灯泡亮度保证色彩真实。 1 ） 把显微镜左侧的“亮度调节盘”设置成＜ 12V100W ＞。 2 ） 把透射照明器中的“ NCB11 滤色片”插入光路中。 3 ） 把透射照明器中的“ ND4 滤色片”插入光路中。 4. 调节光路 1 ） 把 10X 物镜转到光路中。 2 ） 把显微镜右侧的“光路转换盘”转到＜ 1 ＞的位置。 （ 100% 光到观察口） 3 ） 向上推透射照明器上的“视场光阑杆”完全打开视场光阑。 4 ） 将系统聚光器上的“孔径光阑杆”转至右侧极限处把“孔径 光阑”完全打开。 5 ） 转动聚光器调焦旋钮把聚光器调至最低位置。 5. 明视场观察时对显微镜的调整 1 ） 把“聚光器转盘”转到＜ A ＞位置。 6 ． 调节视度及瞳距 1 ）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”逆时针旋转，使 摄影取景框进入光路。 2 ）用左眼对着左侧目镜，转动目镜 “屈光度调节环”， 使取景框中的双十字线清晰成像。 3 ）用右眼对着右侧目镜，转动目镜 “屈光度调节环”， 使取景框中的双十字线清晰成像。 4 ）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”顺时针旋转，使 其退出光路。 5 ）调节目镜瞳距，将两目镜视场所见的影像重合在一起。 7. 调焦 1 ）将样品放置载物台中。 2 ）转动同轴粗微调旋钮，将标本对好焦。 8. 聚光器中心调节 1 ）确信 10X 物镜在光路中。 2 ）将“视场光阑调节杆”降低直到能从目镜看到视场光 阑像。 3 ）转动“聚光器调焦钮”升降聚光器，使视场光阑像清 晰地成象在标本面上。 4 ）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在 视场中心。 5 ）更换 40X 物镜。 6 ）调节“视场光阑调节杆”，使视场光阑的象与视场大 致相同。 7 ）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在 视场正中。 9. 进行观察 1 ）选择要使用的物镜 2 ）移动系统聚光器上的“孔径光阑调节杆”，使孔径为 物镜数值孔径的 70 － 80% 。（“把目镜筒转盘”设到 ＜ B ＞位置，转动勃氏镜调焦螺钉使其聚焦，当观察 到物镜的出瞳和孔径光栏的象时，调节其大小。） 3 ）调节“视场光阑调节杆”使视场光阑像与视场相大致 相同。 4 ）把透射照明器里的“ ND 减光片”进入或退出光路以调 节视场亮度。 ◆ 补充说明 如果不需要色温很准确的颜色，可以通过显微镜 左侧的“亮度调节盘”，改变灯泡电压来调节亮 度。 10. 更换样品 利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”，照明器上 的“倾斜装置”，“聚光器再聚焦指紧螺钉，可容易更 换样品。 11. 显微镜操作结束后 1) 关闭电源开关 ( 开关拨至 O) 2) 灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好。 相差（ PH ）显微术 关键点： 将有 ph 标记的物镜与物镜相同 ph 标记的聚光器模块一起送入光路， 在进行显微术前，校正 ( 对中 ) 物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。 1. 用明视场（ BF ）显微术对样品聚焦。 2. 相差观察时对显微镜的调整。 1) 将 ph 物镜转入光路。 2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路中的物镜 ( 步骤 1 中所安置 的 ) 具有相同的 ph 标记。 3)