DNA甲基化与临床应用参考幻灯片.ppt

31 目录 甲基化的作用 2 临床相关应用 4 引言及概念 3 1 甲基化检测相关技术 3 32 DNA 甲基化与临床应用 1 目录 甲基化的作用 2 临床相关应用 4 引言及概念 3 1 甲基化检测相关技术 3 2 为什么 熊猫 是 黑白 的？ —— 基因决定命运 3 同卵双生的孪生子具有完全相同的基 因组。但他们长大成人后在性格、健康方 面往往存在很大差异。 4 先从表观遗传学谈起 相同的基因型 不同的表型 ? 基因 环境 表型 表观遗传学 5 现代表观遗传学 ? 概念： 基因的 DNA 序列不发生改变的情况下，基因的表 达水平与功能发生改变，并产生 可遗传 的表型。 ? 表观遗传学的现象（基因表达的调控方式）： – DNA 甲基化 --- 表观遗传学的核心（最初始的调控方式） – 组蛋白修饰 – MicroRNA – Genomic imprinting 6 不同层次表达调控 7 DNA 甲基转移酶 ： DNMT 胞嘧啶： Cytosine 5' - 甲基胞嘧啶 ： 5-Methylctosine S- 腺苷 - 甲硫氨酸 ： SAM S- 腺苷 - 高半胱氨酸 ： SAH DNA 甲基化 是指在 DNA 甲基化转移酶 的作用下，在基因 组 CpG 二核苷酸的 胞嘧啶 5 ‘ 碳位以共价键结合一个 甲基 基团。 DNA 甲基化的概念 8 DNA 甲基转移酶 (DNMT) ? 哺乳动物体内有三种 DNA 甲基化转移酶： —— DNMT1 、 DNMT3A 和 DNMT3B 。 ? DNMT1--- 持续性 DNA 甲基转移酶；与甲基化相关，缺 乏引起基因组低甲基化，染色体缺失、重排、突变畸形。 ? DNMT3A 、 DNMT3B--- 从头甲基转移酶；与去甲基化相 关，在胚胎干细胞和早期胚胎中高度表达，缺乏引起胚 胎死亡，在肿瘤组织中广泛高表达。 9 ? 通常 启动子 和 第一个外显子区 ， CpG 序列密度非常高，超 过均值 5 倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区。 ? 结构基因组中 70% ～ 90% 的独立 CpG 都被甲基化 , 未甲 基化的 CpG 成簇地聚集形成 CpG 岛 ? 约有 60 ％以上基因的启动子含有 CpG 岛。 — 是结构基因启动子的核心序列和转录起始点。 CpG 岛（ CpG island ） 预测软件 http://pbil.univ-lyon1.fr/software/cpgprod_query.html http://www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/cpgplot/ 10 目录 甲基化的作用 2 临床相关应用 4 引言及概念 3 1 甲基化检测相关技术 3 11 DNA 甲基化的生物学作用 ? 在发育和分化中调控基因的表达 ? 转录抑制 ? 特征性表型基因的表达（肤色、毛发） ? X 染色体的失活（ X-inactivation ） ? 基因印记 ? 碱基突变 ? 肿瘤代谢 12 DNA 甲基化作为一种可遗传的表观遗传 修饰，在体细胞增殖过程中通过依赖于 DNA 复 制的 DNA 甲基转移酶 Dnmt1 稳定地传递给子细 胞。但在胚胎发育的不同时期，基因组范围内 的 DNA 甲基化水平会发生剧烈的改变，改变最 剧烈的阶段为 配子形成期 与 早期胚胎发育 阶段， 甲基化模式在配子形成时已经建立。 DNA 甲基化与胚胎发育 13 DNA 甲基化在动物胚胎和生殖细胞发育过程中的重编程 14 CPG island 的功能：通过甲基化与去甲基化，调控下游基因的表达 —— 基因表达的调控开关 转录抑制 15 影响基因表达 直接抑制基因表达或甲基化 的 CpG 双核苷酸序列可被甲基结 合蛋白家族 识别，而后者可通过 吸引补充 组蛋白去乙酞化酶 和 组 蛋白甲基化转移酶等组蛋白修饰 蛋白质 来改变染色质的活性 ，以 间接方式影响基因表达。 16 IAP: intracisternal A particle ? 去甲基化：灰鼠基因（ agouti ）仅微量表达 ? 甲基化：基因超量表达 特征性表型基因的表达 17 X 染色体的失活 ? X 染色体的失活（ X-inactivation ）：生长发育过程中， 雌性哺乳类动物细胞中的两条 X 染色体其中一条失去活 性的现象。 ? 研究发现失活的染色体上 DNA 序列都呈高度甲基化， 导致绝大多数基因转录处于关闭状态。 ? 避免因拥有两条 X 染色体而产生双倍 基因产物，保持和雄性动物 X 染色体 数量及功能上的一致性。 18 基因组印记？ 组织或细胞中，基因的表达具有亲本选择 性，即只有一个亲本的等位基因表达，而 另一亲本的等位基因不表达或很少表达的 现象，相应的基因则称为印记基因。 ? 父系不表达称父系印记