菌种退化复壮与保藏.pdfVIP

第四节 菌种退化、复壮与保藏 在生物进化中： 遗传性的变异是绝对的，稳定性是相对 的； 在变异中： 退化性的变异是大量的，进化性的变异 是个别的。 一.菌种的退化 1.菌种退化degenerat ion的表现 生产性状的劣化,遗传标记的丢失, 原有的典型 性状的不典型等 n 菌落及细胞形态的改变 n 生长速度缓慢 n 代谢产物生产能力下降，即负突变 n 致病菌对宿主侵染力下降 n 抗不良环境条件 （抗噬菌体，抗低温）能力减弱 2. 菌种退化的原因：基因自发突变 § 退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变 的逐步演变过程。 -8 -9 § 自发突变率10 -10 § 加速退化的因素 Ø 传代次数过多 Ø 不适宜的培养条件 3.防止退化的措施 （1）控制传代次数 （2）创造良好的培养条件：培养基；培养温度等 保藏培养基： 细 菌：营养琼脂 放线菌：高氏一号 霉 菌：察氏培养基 酵母菌：YEPD高渗培养基。 （3）利用不易衰退的细胞传代：霉菌、放线菌： 无性孢子或有性孢子 （4）采用有效的菌种保藏方法 二. 菌种的复壮 rejuvenat ion 狭义复壮 广义复壮 在菌种已发生衰退 在菌种的典型特征或 的情况下，通过纯种分离和 生产性状尚未衰退前，就 测定典型性状、生产性能等 经常有意识地采取纯种分 指标，从已衰退的群体中筛 离和生产性状的测定工作， 选出少数尚未退化的个体， 以期从中选择到自发的正 以达到恢复原菌株固有性状 突变个体。也称生产育种 的相应措施； 1.纯种分离法 平板表面涂布法 菌落纯 平板划线分离法 （菌种纯） 琼脂培养基浇注法 纯种分离法 用 “分离小室”进行单细胞分离 细胞纯 用显微操纵器进行单细胞分离 （菌株纯） 用菌丝尖端切割法进行单细胞分离 菌株：又称品系,表示任何由一个独立分离的单细胞 (或单个病毒粒子)繁 殖而成的纯种群体及其后代。因此,一种微生物的每一个不同来源的纯培养 物均可称为该菌种的一个菌株。 2、通过宿主体复壮：病原菌 3、淘汰已衰退的个体 对S. m icroflavus “5406”农用抗生菌 的分生孢子采用-10～-30℃的低温处理5～7天， 使其死亡率达到80%左右，结果会在抗低温的 存活个体中留下未退化的个体，从而达到复壮 的效果。 三. 菌种的保藏 （一）目的 使微生物菌种保持原来的性状和活力不退化、 不死亡、不被污染，便于研究、交换和使用 。 （二）原理 挑选典型培养物 （typica l culture）的优良纯 种，并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于 代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。 措施 § 低温：生长温度低限约为-30℃，水溶液中 酶促反应温度低限-140℃ § 干燥 § 缺氧 § 避光 § 缺乏营养 § 添加保护剂：甘油、脱脂牛奶、血清白蛋白 § 添加酸度中和剂 （三）菌种保藏方法 1.斜面保藏法 § 方法：接种适宜斜面培养基 → 培养 → 4