ELISA灰区地设置及质控方法.pdfVIP

标准实用 ELISA 灰区的设置及质控方法 ELISA 测定的阳性判断值，通常是将大量阴性和阳性人群的测定数据进行统计分析后确定 的，其确定依据为判断结果的假阳性和假阴性率最低。 在阳性判断值周围一定范围内之外的 测定结果可归为可疑，亦即 ELISA 测定的“ 灰区 ”。“灰区”的大小可用统计学方法确定。 测定结果处于 “灰区”的样本， 可通过确认试验或追踪检测来确定到底是阳性还是阴性。 ”。 “灰区”的大小可用统计学方法确定 ?? 具体是怎么确定的，。 或者大概粗略的方法计算是怎么样的呢？？高手在哪呢 ELISA “灰区”是把定量分析的正常 值范围引入定性分析而建立的概念。 灰区的设置有二种： （1）C.O×（ 1±C）， C 为该试剂的批内 C ( 一般在 15-20%间）； （2 ）C.O±2S，S 为实验室做室内质控 ROC的 S。 另外，个人认为： ELISA “灰区”对于不同项目和应用的领域不同 , 其设置不能一概而论。根 据美国疾病控制中心 （CDC）对美国 Ortho 的抗 HC检测的 ELISA 试剂盒进行研究， 发现只有 检验结果 S/CO≥3.8 时，高度预示 HC抗体真阳性状态；若检验结果 S/CO3.8 ，存在较高的 假阳性。 在血站系统的献血员抗 HC筛查用上述两种灰区的设置方法没有什么不可； 如果临 床实验室抗 HC的灰区也按前者设置，势必存在较多的假阳性，如何设置灰区应该是值得研 究和商榷的。这位老师好，不好意思，本人愚昧，还不是很清楚这两种方法在实际的应用， 可否举一个小例子。 比如 HBsAg0.5 是阳性， 如果测量得吸光度是 0.4 的话怎么判断， 结果 是阴性，但是是有很明显颜色的。在血站系统这样的血就不敢用， 怎么解决呢，我们经常遇 到测量阴性但是有颜色的标本， 用不同厂家的试剂或是同种试剂重复实验还是一样， 又担心 存在弱抗体的问题。 怎么解决呢，万分感激国内试剂测 HBSAG的 cutoff 值一般不会达到 0.5 ，除非不做空白。 其 cutoff 的公式一般为 NC*2.1 。我只是举例。别找问题以外的事情来说呀，我等答案等得 着急第三章 ELISA 技术的质量控制 概述 Engall 和 Perlmann 于 1971 年首先建立了酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay,ELISA ）。随着科技的发展， ELISA 在抗原、抗体、酶、固相载体及包被技术等方面 都有较大的进步， 其灵敏度和特异性均大大提高。 由于该技术具有简便、 快速、经济等特点， 因而已被广泛应用于各行业。尽管如此， ELISA 在应用过程中仍然存在着许多难点，必须严 格控制才能保证检测的质量。 ELISA 质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。现分述如下： 一、方法学的影响 ELISA 测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、 IgM 抗体捕捉法、 竞争抑制法， 其中竞争抑制法因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响， 结果重复性 较差，质量较难控制。 二、试剂因素 1. 试剂的选择 免疫检测的原理均基于抗原抗体反应。 由于该反应过程受多种因素的影响， 如普遍存在基质 效应、 交叉反应等， 因而检测结果难以溯源， 不同方法、 不同试剂之间甚至同一试剂不同