培养基母液的制备讲解.ppt

实验一 培养基 母液 的制备 ? 一、实验目的与意义 ? 学习和掌握培养基母液的配制方法。 ? 在配制培养基前，为了使用方便和用量准 确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、 有机物质、激素类分别配制成比培养基配 方需要量大若干倍的母液。当配制培养基 时，只需要按预先计算好的量吸取母液即 可。 ? 二、实验器材 ? 电光分析天平（感量为 0.0001g ）、扭力天平 （感量为 0.01g ）、台秤（感量 0.5g ）、烧杯 （ 500ml 、 100ml 、 50ml ）、容量瓶（ 1000ml 、 100 ml 、 50 ml 、 25 ml ）、细口瓶（ 1000 ml 、 100 ml 、 50 ml 、 25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。 ? 三、实验药品 ? NH4NO3 、 KNO3 、 CaCl2· 2H2O 、 MgSO4· 7H2O 、 KH2PO4 、 KI 、 H3BO3 、 MnSO4· 4H2O 、 ZnSO4· 7H2O 、 Na2MoO4· 2H2O 、 CuSO4· 5H2O 、 CoCl2· 6H2O 、 FeSO4· 7H2O 、 Na2-EDTA· 2H2O 、 肌醇 、烟酸 、 盐酸吡哆醇 ( 维生素 B6) 、盐酸硫 胺素 ( 维生素 B1) 、甘氨酸 。 ? 四、实验步骤 ? 1 、大量元素 母液 的配制 ? 各成分按照培养基成分表浓度含量扩大 10 倍，用感量为 0.01g 的扭力天平称取，用蒸 馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸 馏水定容到 1000ml 的容量瓶中，即为 10 倍 的大量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签 保存于冰箱中。配制培养基时，每配 1L 培 养基取此液 100ml 。 表 1 MS 培养基大量元素母液制备 序号 药品名称 培养基浓度 （ mg/L ） 扩大 10 称量 (mg) 1 NH 4 NO 3 1650 16500 蒸 馏 水 定 容 至 1000 ml 2 KNO 3 1900 19000 3 MgSO 4 · 7H 2 O 370 3700 4 KH 2 PO 4 170 1700 5 CaCl 2 · 2H 2 O 440 4400 ? 注意： ? (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如 Ca2+ 、 SO42 一、 Mg 2 十和 H2PO4 一等在一起可能发生 化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母 液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用 等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量 重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注 意先后顺序。特别应将 Ca2+ 、 SO42 一、 Mg 2 十 和 H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌 边混合。 ? (2)CaCl2· 2H2O 要在最后单独加入，在溶解 CaCl2· 2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中 的 CO2 ，以防沉淀。另外， CaCl2· 2H2O 放入沸 水中易沸腾，操作时要防止其溢出。 ? ２、微量元素母液的配制 ? MS 培养基的微量元素无机盐由 7 种化合物 （除 Fe ）组成。微量元素用量较少，特别 是 CuSO4· 5H2O 、 CoCl2· 6H2O ，因此在 配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表 2 ，表 3 配方，用感量为 0.0001g 的电光分析天平称 量，其它同大量元素。配制培养基时，每 配制 1L 培养基，取微量Ⅰ 10ml ，微量Ⅱ１ ml 表 2 MS 培养基微量Ⅰ的配制 序号 化合物名称 培养基浓度 （ mg/L ） 扩大 100 倍称量 (mg) 1 MnSO 4 · 4H 2 O 22.3 2230 2 ZnSO 4 · 7H 2 O 8.6 860 3 H 3 BO 3 6.2 620 4 KI 0.83 83 5 CuSO 4 · 5H 2 O 0.025 2.5 6 CoCl 2 · 6H 2 O 0.025 2.5 7 Na 2 MoO 4 · 2H 2 O 025 25 ? 3 、铁盐母液的配制 ? 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁， 只需和大量元素一起配成母液即可。 目前常用 的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合 物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来 方便，又比较稳定，不易