外源基因在植物细胞中表达.ppt

外源基因在植物细胞中的表达 Crown gall Roots  基因的体外重组和表达体系最早是利用大肠杆菌作 为宿主,以后逐渐发展到真核生物细胞作为宿主,如酵 母、植物细胞和动物细胞等。以植物细胞作为转化受体, 不仅能把一些植物基因或DNA片段作为外源基因转化到 受体植物,而且能把动物或微生物中存在的基因转化并 整合到植物基因组中,使其在植物细胞中表达。  外源基因在真核生物细胞中的表达,对于分 子生物学理论研究,对真核生物基因表达调控的 探讨提供了其他试验方法难以达到的有力手段。 外源基因如何才能转入真核细胞?又如何能 从数量庞大的细胞群体中筛选出遗传转化的细胞? 又是如何对转化的真核生物进行鉴定?  选择标记基因和报告基因: 1.基因转化的选择标记 选择标记一般是一种基因,即选择标记基因,他在转化 前与待转化外源基因相连接,当把已转化和未转化的细胞 群体置于加有选择剂的(抗生素)的培养基上进行培养时, 已转化的细胞群体或再生植株由于带有选择标记基因,该 基因的产物—-酶能分解培养基中加入的选择剂,因此,转 化细胞对选择剂具有抵抗能力,不受选择剂毒害而正常地 生长,发育。相反未转化细胞或再生植株受培养基中选择 剂的毒害,而不能存活下来而被淘汰。  (1)新霉素磷酸转移酶(氨基葡萄糖苷磷酸转移酶, neomycin phosphotransferase I, NptI) NptⅡ基因表达产生的酶可催化许多氨基葡萄糖苷类抗生 素(如新霉素,庆大霉素,卡那霉素和G-418)的O-磷酸化, 使抗生素失去对细胞的毒性,这是由于磷酸化的抗生素不能 与植物细胞叶绿体和线粒体中的核糖体30S亚基结合,进一步 影响70S起始复合体合成,干扰线粒体和叶绿体的蛋白质生物 合成,使植物细胞最终死亡,因此,与外源基因结合的Npt基 因转化细胞后,就可在含有抗生素的培养基上存活下来