农残分析7 可见紫外分光光度法讲解.ppt

( 二 ) 可见比色分析 可见比色分析法就是吸收光谱在可见光范围内的分 光光度法。可见光波长范围是由紫色的 400nm 到红色的 760nm 。 随着分光光度计的发展，比色测定已由分光光度计代 替了旧时的比色计。分光光度计与比色计相比，具有准确、 省时、选择性好的优点，现代的分光光度计都具有扫描功 能，可以通过吸收曲线，找出被测物质的最佳吸收波段， 还可以从吸收曲线上选择合适的条件，以减少杂质的干扰 。 农药的可见光比色分析有以下几种情况： 农药有效成分本身带有颜色，可以直接进行比色 ，这 种农药数量很少，如敌克松原药为黄棕色，在波长 435nm 处有最大吸收峰。故可直接进行比色测定。 农药本身无色，经化学反应，引入或生成一个显色基 团而变成有颜色的化合物，此过程称为“显色” ，大多数 农药都需要显色，才能进行测定。 (1) 经化学反应可以生成有色化合物，如对硫磷经碱解 后形成对硝基酚而呈黄色。五氯酚经氧化形成四氯代苯醌 呈黄色。 (2) 引入显色基团生成有色化合物：如农药经酸、碱水 解产生酚类或芳胺，可与偶氮试剂进行偶合形成有色化合 物，偶氮试剂则称为显色剂。 1 ． 含氯农药的颜色反应 (1) 吡啶 — 碱显色反应 (Fujiwara 反应 ) 含卤素农药在碱性溶液中，与吡啶短时间加热，至少 有两个卤原子和一个碳原子成键，产生红色或蓝色。 如 DDT 与含有呫啐酚的吡啶溶液及氢氧化钾加热生成 红色。可在 510 nm 处测定光密度。 三氯杀螨醇在碱性条件下，水解产生氯仿，氯仿在 碱 — 吡啶作用下生成红色，可在 535nm 处测光密度。氯丹 可以产生紫色 (404nm) ，毒杀芬可产生黄色 (400 nm) ，七 氯、克菌丹、敌敌畏等都有此反应，反应过程中，含有水 或乙醇对颜色形成有干扰。 2 ．检出限 检出限不仅决定于吸光系数。也决定于所用仪 器的噪声水平。对多数商品分光光度计而言， 1 ％吸 收 ( T ＝ 0.99 ， A ＝ 0.004 ) 与其最小可测信号相符。 在理想情况下，摩尔吸光系数可高达 10 5 ，如使 用 1cm 光程吸收池，吸光度范围在 0.1 — 1.5 时，浓 度范围则为 1 × 10 － 6 — 1.5 × 10 － 5 mol ／ L 。 如果待测化合物的摩尔吸光系数为 10 5 ，使用 10cm 吸收池则近似检出限将是 4 × 10 － 9 mol ／ L 。 四、分子结构与电子光谱 （一）可见及紫外吸收光谱的产生 物质的分子在室温下，一般处于 基态能级 ，当它受到 电磁辐射 的作用时，吸收一定能量的光子，使分子受到激 发，就从原来能量较低的基态能级跃迁到能量较高的能级 ( 激发态 ) ，而产生吸收光谱。 分子跃迁有三种类型，即 电子跃迁，振动跃迁及旋 转跃迁 ，这三种跃迁所需的能量不同，可以产生三种不同 的吸收光谱，即电子光谱、振动光谱及转动光谱。 振动光谱及转动光谱能级跃迁需要能量较小，位于 红外区及远红外区，电子跃迁所需能量最大，在 1 — 20eV( 电子伏特 ) 之间，位于可见与紫外光区，这种光谱又 称为 电子光谱 或可见紫外光谱。本章要讨论的可见紫外光 谱就是由电子跃迁所产生的。 1 ．有机化合物中价电子的类型 在有机化合物中有几种不同性质的价电子，根据分 子中电子成键的种类不同，可分为三种类型：形成单键的 电子称为 σ 键电子 ；形成双键的电子称 π 键电子 ，氧、氮、 硫、卤素等含有未成键的电子称为 孤对 n 电子 。以醛基为 例示意如下： 当有机化合物吸收紫外光时，这些价电子可以从基态 跃迁到较高的能级状态 ( 受激态 ) ，此时电子所占的轨道称 为 σ* ， π* 反键轨道 。 2 ．电子跃迁的类型 有机化合物分子中电子跃迁的方式与键的性能有关。 电子跃迁主要有下面几种类型，即 σ→σ* 、 n→σ* 、 n→π* 及 π→π* 。各种跃迁所需能量大小为