e 7-2人工合成核酸的基本步骤.docVIP

e7-2 人工合成核酸的基本步骤 （一）起始原料的制备 1. 核苷酸的来源 合成所需要的核苷酸单体可以从某些生物中制备（如鲑鱼的精子），也可以通过化学合成得到。 2. 核苷的保护 一般使用二甲氧基三苯基（dimethoxytrityl group，DMT）对核糖或脱氧核糖的5′-羟基进行保护，用脂酰基（acyl）对碱基上的氨基进行保护。如苯甲酰基（benzoyl，Bz）对A或C上的氨基进行保护，异丁酰基（isobutyryl）对G上氨基的保护[图e7-1(1)和图e7-1(2)]。如果要合成RNA，还需要使用氰乙基（cyanoethyl）对2′-羟基进行保护。 图e7-1(1) 核苷酸的制备、保护和3′-羟基的活化 保护基团所起的作用是，既能防止反应发生在不该发生的位置，还能增加核苷酸在有机溶剂中的溶解性。 图e7-1(2) 碱基的保护 DMT对5′-羟基的保护是暂时的，在合成中需要使用酸处理的方法将其除去，以便让后面的偶联反应得以进行。由于为碱基上的氨基提供保护的脂酰基对酸很稳定，因此，在合成中可以保留不变，只需在最后一步去保护反应中使用氨水处理即可。 3. 磷酸化或亚磷酸化 这一步的目的是在3′-羟基加上反应性磷基团。磷可以是五价的（磷酸），也可以是三价的（亚磷酸），但三价磷的反应性更强。 （二）偶联反应 这一步反应的目的是让核苷酸之间只能通过3′, 5′-磷酸二酯键连接起