流式的原理及应用讲解.ppt

31 流式细胞仪操作的基本流程 32 流式细胞仪操作的基本流程 开机和液 流启动 质控 样本收集 数据分析 样本收集 数据分析 清洗和 关机 33 流式分析样本的制备 34 流式分析样本的制备 35 流式分析样本的制备 ? 单细胞悬液的制备 ? 目的分子的标记 ? 样本过滤等待上机 36 流式分析样本的制备 37 流式分析样本的制备 38 流式分析样本的制备 39 流式分析样本的制备 40 流式分析样本的制备 流式的原理及应用 杜欣康 BD 生物科学，流式细胞仪技术支持 电话： 邮箱： Jack_du@BD.com 2 什么是流式细胞术 3 什么是流式细胞术 ? 流式细胞术 （ Flow Cytometry ）是指利用 流式细胞仪，通过检测细胞上 / 内特异标记 的荧光信号，从而测定细胞的多种生化特性 （表面受体、抗原、离子、 DNA/RNA 等的 表达）的方法。 4 流式细胞术的特点 5 流式细胞术的特点 ? 分析对象： 任何直径 50 μ m 的颗粒，一般 为单细胞悬液 6 流式细胞术的特点 ? 分析对象： 任何直径 50 μ m 的颗粒，一般 为单细胞悬液 ? 分析速度： 快速， Calibur 2,000 事件 / 秒 7 流式细胞术的特点 ? 分析对象： 任何直径 50 μ m 的颗粒，一般 为单细胞悬液 ? 分析速度： 快速， Calibur 2,000 事件 / 秒 ? 检测参数： 多个（两个散射光，多个荧光 参数） 8 流式细胞术的特点 ? 分析对象： 任何直径 50 μ m 的颗粒，一般 为单细胞悬液 ? 分析速度： 快速， Calibur 2,000 事件 / 秒 ? 检测参数： 多个（两个散射光，多个荧光 参数） ? 检测结果： 精度高，准确性好，具有统计 学意义 9 BD 公司的分析型流式细胞仪 10 BD 公司的分选型流式细胞仪 11 流式细胞仪的结构 12 流式细胞仪的结构 ? 液流系统 – 收集细胞并使之与激光正交 13 流式细胞仪的结构 ? 液流系统 – 收集细胞并使之与激光正交 ? 光学系统 – 激发和收集光信号 14 流式细胞仪的结构 ? 液流系统 – 收集细胞并使之与激光正交 ? 光学系统 – 激发和收集光信号 ? 电子系统 – 把光信号按比例转化成电子信号 15 流式细胞仪的结构 液流系统 废液桶 鞘液桶 上样针 流动室 激光正交 16 流式细胞仪的结构 液流 样本 样本 鞘液 鞘液 鞘液 鞘液 红激光 蓝激光 紫激光 低流速 高流速 17 流式细胞仪的结构 ? 流速： – 低速 12 μ l/min – 中速 35 μ l/min – 高速 60 μ l/min 18 流式细胞仪的结构 光学系统 19 流式细胞仪的结构 长通 接收器 带通 长通 + 带通 20 流式细胞仪的结构 21 流式细胞仪的结构 Laser Wavelength Min. Power Commonly Used Fluorochromes (nm) (mW) or Dyes Blue 488 nm 13 FITC, PerCP , PerCP-Cy5.5 Red 633 nm 11 APC, APC-Cy7, APC-H7 Violet 405 nm 30 Pacific Blue ? , DAPI, BD Horizon V450 and V500 Near UV 375 nm 7 Hoechst Red, Hoechst Blue, PI, DAPI Yellow-Green 561 nm 30 PE, PE-Cy5.5, PE-Cy5, PE-Texas Red ? , mCherry, PE-Cy7, PI Blue-Violet 445 nm 20 CFP , AmCyan fluorescent pro