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5,离子交换层析
优点:
①具有开放性支持骨架,大分子可以自由进入和迅速扩散,故
吸附容量大;
②有亲水性,对大分子的吸附不大牢固,用温和条件便可以洗
脱,不致引起蛋白质变性或酶的失活;
③多孔性,表面积大、交换容量大、回收率高,可用于分离和
制备
(1)基本原理
基质
离子交换剂是由电荷基团(或功能基团)
反离子
纤维素OCH2-COO-Na+
基质
电荷基团反离子
图5.羧甲基纤维素离子交换剂组成示意图
离子交换剂与生物大分子间的亲和力取决于:
每个分子能够和离子交换剂形成的
静电键的数月电荷数目多寡
与分子中电荷的排布有关
由于不同蛋白质有不同的p,在同-pH下,各种蛋白质
所带的电荷种类和数量不同,因此与离子交换剂的吸附作用
的强弱不同,有些甚至完全不吸附。从而将有不同电荷的蛋
白质分开。然后通过改变缓冲液的盐浓度(离子强度)和pH,
用溶液中的离子置换吸附上的蛋白质,吸附力弱的先洗脱下
来,吸附力强的后洗脱下来,从而使蛋白质混合物的组分分
开。
1)吸附阶段:
①紧密吸附:静电键的数目相当多,以致它们同时解离的概率为零。
处于此状态的物质,被吸附于柱顶而不下移。
②有限吸附平衡:静电键的数目较少,它们同时解离的概率达到
个有限值(0~1间)。只有在此范围内才能达到较高的
分辨率。
③解吸状态:静电键数目极少,同时解离的概率为1,完全不吸附。
2)洗脱(解吸附)阶:
增加缓冲液的离子强度
洗脱方法
改变pH,
洗脱方式梯度洗脱:
阶段洗脱
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