研究生实验二资料教程.ppt

;ELISPOT简介;ELISPOT技术的发展 ;ELISPOT与ELISA的比较;106抗原呈递细胞（APC）中混入特定数量的IFN-γ+的T淋巴细胞 ，经下列方法检测： ELISPOT 细胞内细胞因子染色（FACS） ELISA ;BD ELISPOT 技术优势;BD ELISPOT 应用;BD ELISPOT原理;BD ELISPOT 流程;3．细胞悬液加入Ag或有丝分裂素等刺激剂孵育一定时间以激活细胞――细胞分泌的蛋白紧靠在细胞周围，与已固定的捕获抗体结合;5．加入生物素标记的针对被分析物的检测抗体――检测抗体与被分析物结合，形成 ‘夹心三明治’复合物;;Coating Ab 包被培养板;去除细胞，加入冰冻去离子水200ul/孔， 培养板置冰上10分钟 ;ELISPOT 结果显示;ELISPOT 结果显示;BD ELISPOT 结果分析;BD ELISPOT 操作注意事项1;5.背景过高的克服方法： 增加洗涤的次数。 在显色之前用PBS洗涤以去除Tween-20，防止对显色的干扰。 如果需要,增加干燥ELISPOT板的时间。 彻底洗去细胞减少非特异性斑点。 掌握好显色时间，防止过度显色。 6.实验结束后将ELISPOT板室温晾干，不能高于37℃防止损坏PVDF膜。 7.待ELISPOT板干燥后，将其保存在密封的塑料袋中防止褪色。 ;ChampSpotⅡ酶联斑点分析系统简介;;ELISPOT酶联斑点分析软件和ELISPOT计数分析软件;ELISPOT酶联斑点分析软件和ELISPOT计数分析软件