乳汁中含有人生长激素的转基因牛.ppt

乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷);转基因抗虫棉;专题一　基因工程;DNA重组技术的基本工具;基因工程的概念;基因工程的别名;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？;DNA 重组技术的基本工具;识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。; 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。;限制酶;什么叫黏性末端？;什么叫平末端？;;限制酶所识别的序列有什么特点？;二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶;; T;;答：不是一回事。基因工程中所用的连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口（nick），而不能连接单链DNA。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？ ;（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段 的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在 两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个 核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键．;三、 “分子运输车” —基因进入受体细胞的载体：;;;练习答案;2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。;迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所???别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵 ;基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid），即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？其实不然，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。 （1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 （2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 （5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;课本知识回顾;DNA 重组技术的基本工具;限制性核酸内切酶;二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶;基因进入受体细胞的载体