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生物学实验常用技术 一、分子方面 1、基因工程 2、蛋白质工程 1）PCR 1）蛋白收集 （Polymerase Chain Reaction） （蛋白裂解液 +PMSF； (二楼 PCR 仪器全部会用 ) 1×Loading 裂解（推荐）） 2）RT-PCR；Q-PCR 2）SDS（电泳胶的配制） 3）琼脂糖凝胶电泳；胶回收 2）考马斯亮蓝染色，银染 4）酶切 /链接 3）Western blot 5）转化 4）蛋白定量常用的方法及原理， ）固体 液体 LB 培养基配制 以及熟练操作 Bradford 法蛋 6 / （高压蒸汽灭菌锅使用方法） 白定量 7）质粒大 /小抽原理及步骤 （手提、溶液 I、II 、III 作用） 8）基因组 DNA 抽提 9）RNA 提取； （ TRIZOL 法原理、注意事项及步骤） 二、细胞方面 1）细胞培养、传代 2）细胞冻存与复苏 冻存液配制： （1）DMSO:血清 =1:9（推荐） （2）DMSO：培养基：血清 =1:3:6 均可 DMSO 为细胞专用型；现用现配，效果最好；冻存时细胞在 -80℃ 中不要超过一周，最好在 24-48h内放入液氮罐中保存。 3）细胞培养基配制（过滤除菌） 、胰酶配制（过滤除菌），PBS 配制 （灭菌）；（不同培养基的区别；谷氨酰胺（提供氮源） ， 2 周补充一 次） 4）转染 5）MTT 原理及操作（检测细胞存活率或死亡率） 6）碱性磷酸酶实验（ ALP ，检测细胞分化） （5、6 需学会 SPSS软件及 graphpad prism5软件使用） 7）Hoechst染色 8）结晶紫染色（不推荐） 9）苏木精 / 伊红染色 （9 可以替代 8，以后实验推荐使用 9，图片漂亮） 10）荧光显微镜的使用 11）激光共聚焦显微镜样品制备（细胞固定，染色，洗脱） （7、8、9、10、11 需学会 Photoshop常用工具处理数据） 12）流式细胞仪样品制备（包括：转染效率和细胞凋亡染色标记）以 及仪器操作（需学会 FlowJo 软件分析流式结果） 三、动物实验 1）小鼠的定制： 常见的小鼠： ICR 小鼠（正常），9 元/ 只 BalB/C 小鼠（正常）， 30 元/ 只 SD 大鼠（正常），30 元/ 只 裸鼠（免疫缺陷小鼠），80 元/ 只 NOD SCID 小鼠（免疫三缺陷），250元/ 只 其中前四种是常用的，最后一种以后可能会用到。 浙江中医药大学 ：小鼠品系齐全，可提供以上小鼠静脉注射，提供体 内原位成瘤手术； 杭州师范大学 ：NOD SCID 品系小鼠没有， 不提供 裸鼠静脉注射，不提供体内原位成瘤手术。 2）小鼠成瘤（熟练皮下成瘤操作） ； 3）肿瘤测量（游标卡尺测量； IVIS 测量（推荐，前体要构建 Luc 细 胞系）） 4）慢病毒转染构建稳转 Luc 癌细胞系 5）小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及 ICR 小鼠的尾静脉注射 6）小鼠尾部和眼球取血 7）小动物活体成像仪的原理及使用方法 8）小鼠解剖及组织固定 电镜样品： 2.5%戊二醛固定； 免疫组化： 10%的福尔马林或 4%的多聚甲醛固定 9）组织电镜样品的制备及 TEM 的使用 （每个样品 400，额外每张 TEM 照片 5 元） 10）免疫组织切片样品的制备 （蜡块制备 25 元；HE 染色 15 元/ 片；TUNEL ：200元/ 片；免疫 组化： 45 元/ 片(抗体自备 )） 11）免疫组织切片的观察（荧光显微镜和正置光学显微镜使用切换）