实验-薄层色谱法.pptVIP

点样操作： 1. 可利用铅笔画一条线； 2. 样品溶液要点在 0.7-0.8 mm 处； 3. 采用多次点样时，应待前一次点 加的溶剂挥发后再进行 ; 4. 点量应适中，避免斑点拖尾 ; 5. 配制样品的溶剂具有挥发性和 小极性。 2017/7/3 21 实验 3 薄层色谱法 2017/7/3 1 目的和要求 1. 了解色谱分离的原理及其应用。 2. 初步掌握薄层色谱的操作技能。 2017/7/3 2 色谱法概述 1938 年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离 一种天然药物。 1965 年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。 2017/7/3 3 色谱法原理 色谱法（ Chromatography ）亦称色层法、层 析法等。色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的 重要方法之一。 色谱法的基本原理是 利用混合物各组分在某一 物质中的吸附或溶解性能 （分配）的不同，或其亲 和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反 复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。 2017/7/3 4 分 类 1. 按固定相所处的状态分类 ： 薄层色谱（ Thin Layer Chromatography ） 柱色谱 （ Column Chromatography ） 纸色谱 （ Paper Chromatography ） 2. 按分离机理分类： 吸附色谱（ Adsorption Chromatography ） 分配色谱（ Partition Chromatography ） 离子交换色谱（ I EC ） 凝胶色谱（ GPC ） ? 2017/7/3 5 高效液相色谱 (HPLC) 气相色谱 (GC) 仪器分析实验 如上色谱都属吸附色谱类型，用固体吸附剂作固 定相，以不同溶剂作流动相，依据样品中各组分 在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离 2017/7/3 6 6 色谱法三要素 吸附剂（固定相）： 用于与样品发生吸附作用的固定不动的 物质。在混合物样品流经固定相的过程 中，由于各组分与固定相吸附力的不同， 就产生了速度的差异，从而将混合物中 的各组分分开。 2017/7/3 7 吸附色谱三要素 －吸附剂 ⑴ 氧化铝（ alumina ） 氧化铝的吸附活性来源于铝原子上未成 键电子对。氧化铝的活性与含水量有关，含 水量越低，活性越大，吸附力越强。无水氧 化铝吸附活性特别强。根据氧化铝的含水量 可将氧化铝的活性分为五级 。 2017/7/3 8 吸附色谱三要素 －吸附剂 * 酸性氧化铝 （ pH ＝ 5-4 ），适用于分离酸性化合物 和对酸稳定的中性化合物，如酚类物质和某些氨 基酸类等。 * 中性氧化铝 （ pH ＝ 7.5 ），适用与分离生物碱、挥 发油、萜类、甾类、蒽醌以及在酸碱中不稳定甙 类、酯、内酯等化合物。凡是能用酸性或碱性氧 化铝层析分离的物质，中性氧化铝也都适用。 * 碱性氧化铝 （ pH ＝ 9-10 ），适用于碱性，如生物 碱和中性化合物的分离。 2017/7/3 9 吸附色谱三要素 －吸附剂 ⑵ 硅胶 silica gel 它的吸附性来源于 硅胶氧原子上未成键 的电子对和可以形成 氢键的羟基。羟基有 结合型（Ⅰ）、活性 型（Ⅱ）和游离型 （Ⅲ）三种 2017/7/3 10 吸附色谱三要素 －吸附剂 活性 Ⅰ Ⅱ 氧化铝含水 量（％） 0 硅胶含水量 （％） 0 3 8 10 15 5 15 25 38 11 Ⅲ Ⅳ Ⅴ 2017/7/3 洗脱剂（流动相）： 也称展开剂，在色谱过程中起到将吸附 在固定相上的样品洗脱的作用。 乙酸 吡啶 水 醇类（甲醇 乙醇 正丙醇） 丙酮 乙酸乙酯 乙醚 氯仿 二氯甲烷 甲苯 环己烷 正 己烷 石油醚 * 从前到后 - 洗脱能力降低。 2017/7/3 12 试样： 在给定的条件下，各个成分的分离情况， 与被分离物质的结构和性质有关，对极性吸附 剂而言，被分离物质的极性越大，两者吸附作 用也越强。具有极性基团的化合物，其吸附能 力按下列顺序增加： Cl, Br, I C=C OCH 3 CO 2 R C =O , CHO -SH- -NH 2 -OH -CO 2 H 结论：若样品极性越小，或流动相极性越大，样品 在固定相上的移动速度则越快。 2017/7/3 13 在吸附层析中，试样、洗脱剂和吸附剂三者关 系。它们三者的关系如下图。 Stahl 简图 （ 1 ）离化合物的极性； （ 2 ）吸附剂的活度； （ 3 ）展开剂的极性。 若将这三个因素各自固定在圆周的 三分之一，转动圆盘正中的三角形， 如果角 A 指向极性物质，则角 B 指向 活度小的吸附剂，角 C 就指向选用极 性展开剂； A, B, C, 处则是合