核酸检测技术及质量控制课件.ppt

扩增产物的检测与分析 ? 荧光定量 ? 普通凝胶电泳 ? 毛细管电泳 污染的控制和预防 ? 常见污染的来源 ? 控制污染的措施 ? 消除污染的措施 三、实验室生物安全管理 为什么关注实验室生物安全？ 三起 SARS 疫情后期的实验室感染事件 ? 2003 年 9 月 8 日： 新加坡国立大学实验室 ，在 P3 实验室 同时开展西尼罗病毒与 SARS 病毒的研究，一位 27 岁华人研 究员感染； ? 2003 年 12 月 6 日： 台湾省国防大学预防医学研究所 ，一 名 47 岁的中校研究员，在 P 3 实验室内清理 SARS 实验后的废 弃物时，未戴手套，因而感染； ? 2004 年 4 月 22 日： 中国 CDC 病毒所 ，跨室开展 SARS 病毒 研究，并引发三代、 9 例 病例、 1 例死亡；另有两例 “隐 性”感染者。 引起实验室生物污染的原因很多很多 ? 人员 生物安全概念薄弱和技术操作不当； ? 生物安全柜和高压灭菌容器的不正常 使用 或使用 不当； ? 样品传递、接受和使用、装有冻干感染性物质安 瓿的打开； ? 匀浆器、组织研磨器、摇床、搅拌器和超声处理 器的使用； ? 离心机内装有潜在感染性物质的离心管发生破裂 生物安全的概念 ? 实验室生物安全 避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩 散并导致危害的综合措施。 ? 生物安全三个方面： 一指 人类 的健康安全；二指人类赖以生存的 农业生物 安全； 三指与人类生存有关的 环境 生物安全。 微生物实验室生物安全 ? 三项技术措施 ? 样品隔离技术（机械、气幕 ) ：防止传染因子进 入环境接触人体 ? 定向气流技术（负压系统 ) ：防止传染因子扩散 ? 消毒灭菌技术（物理、化学 ) ：灭活传染因子 实验室可以分为 ? 基础实验室 —— 一级生物安全水平 ? 基础实验室 —— 二级生物安全水平 ? 防护实验室 —— 三级生物安全水平 ? 最高防护实验室 —— 四级生物安全水平 ? 根据操作不同危险度等级微生物所需的实验室设计特点、 建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决定 实验室的生物安全水平。 实验室生物安全防护屏障 ? 一级防 护屏障 ? 生物安 全柜 和 个人防 护装备 等构成 的防护 屏障。 生物安全柜 高效空气过滤器 ? 。 李燕 44 实验室生物安全防护屏障 ? 二级防护屏障 ? 设施结构和通风系统 等构成的 防护屏障。 “ 盒中盒”的结构 实验室生物安全防护水平分级 ? 生物安全水平分级 ? 根据生物因子危害程度和采取的防护措施，将 生物安全防护水平（ biosafety level ， BSL ） 分为 4 级（ BSL-1 、 BSL-2 、 BSL-3 、 BSL-4 表 示）；动物实验室以 ABSL-1 、 ABSL-2 、 ABSL-3 、 ABSL-4 表示。 与一般生物洁净室的区别 1. 工作目的 BSL 实验室： 保护工作人员和环境为主，也保护产品。 安全是首要考虑因素。 生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首 要考虑因素 2. 污染物的种类和来源 BSL 实验室：为目标微生物。内部产生。 生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入 以及人的活动产生。 与一般生物洁净室的区别 3. 空气污染物处理方式 BSL 实验室：平面布局和气流流向的作用 , 产生环节在一 级屏障内进行个体防护。 生物洁净室：主要通过进气净化 减少活动。 4. 洁 、 污概念 BSL 实验室：凡有目标微生物即视为污； 凡无目标微生物即视为洁； 对各环节洁、污应仔细分析。 生物洁净室：粉尘、微生物（特别是超标者）和废弃物均 视为污。 核酸检测技术及质量控制 常州市疾病预防控制中心 王凤鸣 目 录 一、 PCR 实验技术操作要点 二、质量控制要点 三、实验室生物安全管理 一、 PCR 实验技术操作要点 常用仪器设备 加样器 PCR 实验室应备有 4 套 连续可调加样器，分 别用于试剂准备、样 本处理、扩增和产物 检测四个试验区。 加样器的类型 ? 单道连续可调式移液器 ? 多通道连续可调式移液器 ? 单道连续移液器 ? 单道移液管配合使用的移液器 加样器的使用 加样器的校准 ? 校准方式 计量局 厂家 自较 ? 时间 视使用频率定（ 6 个月 -1 年） 加样器 - 注意事项 ? 根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，基因扩增实 验要求使用 带滤芯 的吸头，防止交叉污染。 ? 吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到移液器 头上；打出液体后拇指不应松开按钮，将吸液嘴压 掉后再将拇指松开， 避免液体回吸 。 ? 在调整取液量的旋钮时， 不要用力过猛 ，并应注意 计数器显示的数值不要超过其可调范围。 ? 连续可调式移液器不可在无吸头时使用，