细胞爬片实验方案.docxVIP

- -可编辑修改 - 准备：盖玻片、 4%多聚甲醇、 50% 的甘油 PBS 4% 多聚甲醛溶液 : 多聚甲酵 40g O.lmol/L 磷酸缓冲液 至 1000 mL 方法:称収 40g 多聚甲醛,置于三角烧瓶中 ,加入 500-800 mL 0.1 mol/L 磷酸缓冲液 ,加热持续搜拌 （或磁力搅拌 ）使粉末完令溶解 ,通常需滴加少许 NaOH 才能使溶液清亮，最后补足0.1 mol/L的PBS至1000 mL,充分混匀。 0.1 M （pH 7.4） PBS mol/L Na2HP04 77.4ml 1 mol/L NaH2P04 22.6ml 蒸馏水 加至 1000 爬片的准备 爬片可用一般的盖玻片也可用专用爬片 ,根据自己的需要剪裁成合适的大小 ,以备 置于 6 孔板、12 孔板或 24 孔板;将剪裁好的爬片 ,泡酸过夜,捞出后流水洗净 ,烤 干浸泡于 75% 酒精中备用 细胞爬片 用胰酶消化好细胞 ,充分吹打 ,使之成细胞悬液 ,计数,根据需要调整细胞到适当密 度。取无菌的细胞培养板 ,先加少量培养基 （以使玻片与培养板紧密接触 ）。将玻片 小心从洒精中取出 ,在酒精灯火焰外焰轻轻划过 ,使玻片表面酒精燃烧从而起到灭 菌的效果。待冷却后 ,将玻片轻轻放入培养板中 ,然后将单细胞悬液一逐滴的滴到 上而。然后置于 37°C 5%C02 的细胞培养箱屮培养。培养一定时间后培