血红蛋白的提取和分离高中生物选修一532017人教版.ppt

■高中生物课件（人教课标版） 课题 3 血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 ： （一）蛋白质提取和分离原理 （二）蛋白质提取和分离的方法 1 ）凝胶色谱法：又称分配色谱法 2 ）电泳法 （三）缓冲液的作用 二、实验操作－－实验步骤 样品处理 和粗分离 纯 化 纯度鉴定 血液组成成分 1. 洗 涤 红 细 胞 2. 释放 血红蛋白 3. 分离 血红蛋白 4. 透析 血红蛋白 二、实验操作－－实验步骤 血液组成成分 1. 洗 涤 红 细 胞 2. 释放 血红蛋白 3. 分离 血红蛋白 4. 透析 血红蛋白 样品处理 和粗分离 纯 化 纯度鉴定 蛋白质提取与分离的依据 －－ 蛋白质的物理化学性质差异： 1. 分子的形状、大小 2. 电荷性质和多少 3. 溶解度 4. 吸附性质 5. 对其他分子亲和力 1. 凝胶色谱法 （ 1 ）原理： （ 2 ）材料：凝胶 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 凝胶是 微小的多孔性球体 ，如 葡聚糖或琼脂糖 。 内部有许多贯穿的 通道 . 根据相对 分子质量的大小 分离蛋白质的方法 概念： 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 2 ．凝胶电泳法： 1 ）原理： 不同蛋白质的 带电性质 （正电荷或负电荷） 、电量、 形状和大小 不同，在电场中受到的作用力 大小、方向、 阻力 不同，导致不同蛋白质在电场中的 运动方向 和 运 动速度 不同。 2 ） 影响蛋白质分子运动速度的因素 电泳： 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 思考 ： 蛋白质为什么带有电荷？ 在一定的 PH 下 ，蛋白质可解离的基团会带上电荷 2 ．凝胶电泳法： 1 ）原理： 不同蛋白质的 带电性质 （正电荷或负电荷） 、电量、 形状和大小 不同，在电场中受到的作用力 大小、方向、 阻力 不同，导致不同蛋白质在电场中的 运动方向 和 运 动速度 不同。 2 ） 影响蛋白质分子运动速度的因素 电泳： 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 思考 ： 蛋白质为什么带有电荷？ 3 ） 常用电泳方法 琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入带负电荷多的 SDS ，形成“蛋白 质－ SDS 复合物”，使蛋白质 迁移速率 仅取决于分子大小 。 影响蛋白质分子运动速度的因素 决定 运动方向 电场 作用力 形成 阻力 决定 运动速率 电荷性质 电荷量 分子形状 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ 由 弱酸 和相应的 强碱弱酸盐 溶解于 水 中。 如 H 2 CO 3 /NaHCO 3 ， NaH 2 PO 4 /Na 2 HPO 4 等 （ 4 ）缓冲溶液－－洗脱剂 作用： 配制： 调节酸和盐的用量，可配制不同 pH 的缓冲液。 抵制外界酸碱对溶液 pH 的干扰而保持 pH 稳定。 思考：如何配制不同 PH 值不同的缓冲液？ 血液组成成分 阅读思考： 1. 血液由 ______ 和 ________ 两部分组成。 2. 血细胞中 ________ 细胞数量最多，细胞的含量 最高的化合物是 _____________ 。 3. 该化合物是由 _____________ 和 ____________ 构 成的，其中每个亚基中都含有一个能与 O 2 和 CO 2 结合的 ______________________ 基团。 血浆 血细胞 红细胞 血红蛋白 2 条 α - 肽链 2 条 β - 肽链 亚铁血红素 1. 洗 涤 红 细 胞 阅读思考：