现代科技综述知识文库：逆流色谱的基本关系式.pdf

现代科技综述系列—— 逆逆流流色色谱谱的的基基本本关关系系 式式 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “逆流色谱的基本关系式” 的解读，以供大家了解。 逆逆流流色色谱谱的的基基本本关关系系 式式 逆流色谱(CCC)是一种特殊形式的液－液分配色谱。 它不使用固体支持介质、柱材料中空的聚四氟乙烯管 (PTFE)或玻璃管。 选用不相混溶的两相溶剂系统，其中一相作为固定相 并依靠重力或离心力保留在柱中，另一相则作为流动 相。 被分离的条组分依据其在两相中的分配系数的差异得 到分离。 由于CCC不使用固体支持介质，因而避免了因不可逆 吸附而引起的样品损失、失活变性及失真等，使得样 品可以全部回收。 CCC 的发展最早可以追溯到1934年，R ．D ．Cornish等 研制了一种室状CCC柱并用来纯化油溶性维生素。 1944年L ．C ．Craig发明了不连续的逆流分配(CCD)装 置并应用到有机化学及生物化学领域。 到1966年日本的Y ．Ito等人将离子力引入CCD仪器系 统而研制出螺管行星离心CCC装置，从而推动了CCC 的发展。 进入7 年代后，CCC技术发展迅速，约有十几种CCC 仪器相继问世，其中应用最为广泛的是液滴逆流色谱 (DCCC)，它主要用于天然产物的制备分离。 8 年代初期，新的流体力学现象的发现促使高速逆流 色谱HSCCC 问世。 不论是分离效率还是分离速度，HSCCC都比其它CCC 有很大提高，甚至可以 制备HPLC相媲美。 CCC 已发展成为用于分析目的的制备型CCC系统 用 于分析目的的分析型CCC系统，以及适用于蛋白质等 生物大分子分离的泡沫逆色谱系统等，成为HFLC 的重 要补充。 一般来讲，色谱各参数的定义及其相互间的数学关系 可以直接用于CCC 。 但是，CCC与其它色谱的区别又决定了CCC理论中部 分参数之间的独特关系， 1．容量因子k′。 同其它色谱一样，CCC 的容量因子k′定义为固定相中容 质的量(Qs)与流动相中溶质的量(Qm)之比 2 ．柱效n 。 CCC 的柱效应用理论塔板数n表示： 式中Wb为色谱峰 的基线宽度，VR 、tR分别为溶质的保留体积与保留时 间。 3 ．分离因子。 分离因子α被定义为需分离溶质对的分配系统K 1、 K2 ，容量因子K′1、K′2 ，调整保留时间tR 1′、tR2′或调 整保留体积VR 1′、VR2′的比率，表示为 其中，K2 ＞ K 1，k2′＞k 1′，tR2′＞tR 1′，VR2′＞VR 1′ 4 ．分配系 数。 CCC 由于消除了固体支持介质，使用不相混溶的两相 溶剂系统，分离完全取决于液－液分配。 因此分配系数K是它的最基本参数。 溶质的保留可以通过溶质的分配系数及柱中流动 固 定相的体积来预测分配系数K 的定义为K= 固定相中溶 质的浓度(Cs)与流动相中溶质的浓度(Cm)之比。 K与K′的关系可表示为： 式中Vs Vm分别是在CCC柱 内两相达到平衡时固定相 流动相的体积。 5 ．固定相占柱总体积的分数SF。 设柱子的总体积为Vs，则Vc=Vs+Vm于是得到： 6 ． 溶质保留时间tR与保留体积VR 。 设溶质经过整个柱子所需时间(即溶质保留时间)为tR ， 其中在流动相中的时间为tm ，在固定相中的时间为ts， 溶质的保留体积为VR ， 7 ．分辨率Rs。 在CCC 中，相邻两峰分辨率Rs，定义为 式中VR 1与 VR2分别为两溶质的保留体积，且VR 1＞VR2 ，△V与 △t分别为两溶质的保留体积差 保留时间差，Wb2 Wb 1分别是两溶质峰的基线宽度。 根据色谱的Knax方程，Conw