现代科技综述知识文库：三链DNA.pdf

现代科技综述系列—— 三三链链DDNNAA 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “三链DNA” 的解读，以供大家了解。 三三链链DDNNAA 1957年，Davis、Felsenfield Rich等就提出三链核酸结 构的概念，他们以两条poly(U) 一条poly(A)链合成出 一种三链物质。 1966年， iller Sobell提出第3股RNA可连接到操纵基 因上作为阻遏物的设想，但由于同年证实了乳糖阻遏 物是一种蛋白质，此设想破灭了。 1975年，加州大学L ．E ．Perlgur等人研究体外三链 DNA的形成过程，按标准DNA制备步骤，从牛脾脏中 以 gCl2代替氯化钠－柠檬酸钠缓冲液(SSC)制备出牛 脾DNA的镁盐( gDNA) ；天然牛脾NaDNA经热变性可 制得相应的单链的NaDNA，根据260nm处双链 gDNA 与变性单链NaDNA结合时的减色效应，可推知三链 DNA的形成，其浮力密度为1．726g ／cm3 。 A ．J ．Raae等(1978年)研究在T4聚核苷酸连接酶催化 作用下三链核酸的连接形成过程。 这些核酸确实能够形成三链结构，在紫外吸收曲线上 可以看到有三链核酸的转折点，低温下混合物吸收曲 线的形状表明存在三链化合物 双链化合物，主要产 物还是1 ∶2 的三链结构，实验还发现在三链DNA 中T4 连接酶仍可催化dT 10 的连接，并且反应速率同形成双 链的、三链的DNA的速率大致相同。 研究者们还观察了多胺对反应的影响，发现低浓度的 多肽、腐胺、尸胺及亚精胺(＜10 －3mol ／L)对T4酶在 双链载体上的催化连接反应有激活作用，而当浓度较 高时，则又呈明显的抑制作用。 因此，低浓度的多胺能提高三链结构的连接反应速 率。 J ．S．Lee等(1979年)研究(Py)n ·(Pu)nDNA(Py为嘧啶， Pu为嘌呤)在H+浓度大于10 －6mol ／L情况下的结构形 式与变化，有4条证据表明这种化合物是由一个三链化 合物及一个具有二级结构的多聚d(Pu)组成。 过去有人认为：Py·Pu DNA结构作用的特殊性在于 Py·Pu DNA能与RNA形成三链化合物的高度特异性。 例如，d(TC)u ·d(GA)u 只与r(UC)相互作用形成三链化合 物d(TC)n ·d(GA)n ·r(UC+)n ，两条嘧啶链是反平行的． RNA链沿着DNA的大沟缠绕，以Hoogsteen碱基对方式 配对，这就需要一个质子化的胸腺嘧啶，因此，这类 结构在pH值较低时有利。 A ．G ．Letai等(1988年) 以琼脂连接的均聚核苷酸亲 柱为手段，研究了形成三链核酸化合物的特异性，即 均聚DNA、共聚DNA RNA碱基互补配对的特异性。 1987年，S． ． irkin等从准天然途径中发现DNA的 三螺旋结构，以此为转机，对三链DNA研究的势头在 国外兴盛起来。 irkin等在酸性溶液的质粒中发现DNA的一种三链结 构，称为H －DNA(绞链DNA)，规则的均聚嘌呤核苷酸 －均聚嘧啶核苷酸片段(dC －dA)n ·(dT －dC)n (dG)n ·(dC)n在低pH(4 ．3)条件下，经过超螺旋诱导， 发生结构转变，生成新的DNA构型，即H构型。 研究者提出，H构型可以在任何镜象重复的均聚嘌呤核 苷酸－均聚嘧啶核苷酸中产生(核苷酸序列具有H 回文 形式)，为了验证此假设，采用一系列裁剪过的质粒片