现代科技综述知识文库：生物大分子印渍技术.pdf

现代科技综述系列—— 生生物物大大分分子子印印渍渍技技术术 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “生物大分子印渍技术” 的解读，以供大家了解。 生生物物大大分分子子印印渍渍技技术术 把电泳分离后的生物大分子区带通过电或非电动力转 移于固定化载体纸或膜上使之固定化，用亲 结合技 术一次或多次性地专一检出感兴趣的生物分子，这种 技术称生物大分子印渍技术。 1975年，苏格兰爱丁堡大学E ．M ．Southern首创生物 大分子印渍技术。 他把限制性内切酶作用后的DNA片段进行琼脂糖凝胶 电泳，然后把已分离开的全部DNA区带通过毛细作用 力转移到硝酸纤维素滤纸上，使各区带以非共价连接 于滤纸而被固定化；再用经放射性标记的RNA作探 针，对所得到的转移DNA谱进行DNA－RNA分子杂交 反应，从而检出所需的DNA片段。 由于这种转移过程类似于用吸水纸去吸干墨迹，使纸 染上墨渍，故Southern称之为Blotting(印渍术或印迹 术) 。 Southern 印渍术以后亦称南部印渍术(因Southern含“南 部的”之意)或DNA印渍术。 没过一年，法国Cham on小组用Southren 印渍术研究鸡 胚卵清蛋白基因时，发现了真核生物的基因有不编码 的插入序列。 这一杰出成果被创立DNA双螺旋模型的Crick誉之为分 子遗传学中的一次“微型革命” 。 1977年，Alwine等人将此术应用于RNA的研究，并首 先采用重氮苄氧甲基纤维素纸，由此提出北部印渍术 (Northern lotting) 。 1979年，Tow in等人又把印渍术用于抗原检出，提出 免疫印渍术(Immuno lotting)，以后这种免疫印渍术发 展极快，取得许多研究成果。 1981年，Burnette把免疫印渍术称为西部印渍术 (Western lotting) 。 Tow in等人还创造性地使用电洗脱装置作为印渍动 力，这不仅能真实地获得凝胶分离区带的复制品，而 且也缩短了印渍时间。 这种以电作为印渍动力的印渍术，也被称为电印渍 (Electro lottiing)、电洗脱法(Electroelution)、电转移 (Eletrotransfetr)、电泳转移(Electrophoretic transfer)、横 向电泳(Transversal electrophoresis)等。 1982年，Reinhart等人将等电聚焦法分离蛋白质的凝胶 作为印渍模板，创造了双向印渍术，此被称为东部印 渍术(Eastern lotting)，即为蛋白质印渍术。 在这种情况下，1983年Gershoni Palade提出，印渍术 不要以地区来命名，这一术语应 有关大分子合在一 起使用，如DNA印渍术、RNA印渍术、蛋白质印渍术 等等。 这样，以后又出现了许多名称的印渍术，如大分子印 渍术、酶印渍术、脂多糖印渍术、配体印渍术、酶联 免疫电转移印渍技术、麦胚凝集素印渍术、金印渍 术、过氧物酶免疫印渍术等等。 其中有以欲检出的大分子命名的，也有以配体或染料 命名的。 值得一提的是还有一种点印渍术，其特点是不经凝胶 电泳分离，直接把样品以小圆点或其他几何形状(如小 方块)点于固定化材料上，然后用分子亲 技术检出。 这就是说，这种技术除不经过凝胶电泳外，其它步骤 印渍术相同，故一般把点印渍术作为印渍术的一个 分支。 生物大分子印渍术一般包括凝胶、电泳、印渍、印盖 检出等5个步骤。 根据各步骤中不同的反应体系，还需增加不同的平衡 洗涤过程。 实际上，印渍术是把凝胶电泳技术、固定化技术以及