分子生物学技术课件.ppt

目 录 四、基 因 文 库 Gene Library 目 录 ? 基因组 DNA 文库 (genomic DNA library) ? cDNA 文库 (cDNA library) 基因文库 (gene library) 是指一个包含了某一生物体全部 DNA 序列 的克隆群体。 目 录 目 录 分子生物学技术的原 理及应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application 目 录 一、分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization Blotting Technology 目 录 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在 DNA 复性过程中，如果把不同 DNA 单链 分子放在同一溶液中，或把 DNA 与 RNA 放在一 起，只要在 DNA 或 RNA 的单链分子之间有一定 的 碱基配对 关系，就可以在不同的分子之间形 成 杂化双链 (heteroduplex) 。 目 录 复性 RNA DNA 目 录 探针 (probe) 一小段用同位素、生物素或荧光 染料标标记其末端或全链的已知序列 的多聚核苷酸，与固定在 NC 膜上的核 苷酸结合，判断是否有同源的核酸分 子存在。 目 录 （一）分子杂交 ? 斑点杂交： dot blotting DNA array DNA chips 蛋白质芯片 ? 原位杂交： 细胞原位杂交 组织原位杂交 目 录 目 录 目 录 是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点 阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反 应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统 对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。 蛋白质芯片 (protein chip) 目 录 （二）转移印迹技术 （一） DNA 印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组 DNA 、重组质粒和噬菌体 的分析。 （二） RNA 印迹技术 (Northern blotting) 用于 RNA 的定性定量分析。 （三）蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 ③ 分子杂交实验 ① ② 目 录 目 录 三 种 印 迹 技 术 的 比 较 放 射 自 显 影 照 片 目 录 目 录 二、聚 合 酶 链 反 应 Polymerase Chain Reaction 目 录 ? 模板 DNA ? 特异性引物 ? 耐热 DNA 聚合酶 ? dNTPs ? Mg 2+ （一） PCR 反应条件 5 ? Primer 1 5 ? Primer 2 Cycle 2 Cycle 1 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? Template DNA 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? （二）基本工作原理 目 录 Cycle 3 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 5 ? 25 ～ 30 次循环后，模板 DNA 的含量 可以扩大 100 万倍以上。 目 录 目 录 （三） PCR 的基本反应步骤 变性 95 ? C 延伸 72 ? C 退火 Tm-5 ? C 目 录 1. 目的基因的克隆 2. 基因的体外突变 3. DNA 和 RNA 的微量分析 4. DNA 序列测定 5. 基因突变分析 （四） PCR 的主要用途 目 录 （五）几种重要的 PCR 衍生技术 1. 反转录 PCR 技术 2. 原位 PCR 技术 3. 实时 PCR 技术 实时