基因工程和基因组学精选.ppt

Northern 杂交 : 采用与 Southern 杂交相同的原理及程序，不 同的是用 RNA 进行琼脂糖凝胶电泳。 基本程序 :a. 提取总 RNA ，经过琼脂糖凝胶电 泳 ;b. 转移并进行分子杂交 , 杂交的探针来自 克隆的基因 ;c. 如果膜上有与探针互补的 RNA 分子，则在 X- 光片上可见到杂交信号带。 Northern 杂交广泛用于研究基因在不同细胞 、组织或器官的表达模式，检测 mRNA 分子量 大小以及 mRNA 加工过程中可能存在的不同方 式，定量分析 mRNA 等。 Western 杂交 : 用蛋白质电泳后转移到膜上进行分析 ③ 核酸序列测定 Sanger(1977) 发明双脱氧核糖核酸链终止 法 : 将序列反应分为 A ， C ， G 和 T 四管，每管中 含有变性的 DNA 模板、 DNA 聚合酶、标记的引 物、四种脱氧核苷酸，再掺入一种一定比例 的双脱氧核苷酸 ( 如 A 管中，即是腺嘌呤 A 双脱 氧核苷酸，以此类推 ) 。在 DNA 合成过程中， 双脱氧核苷酸与互补序列配对被整合到正在 延长的 DNA 链中，在不同 DNA 链上随机地整合 在不同位置。由于双脱氧核苷酸在第三位 没有游离的羟基 (-OH) ，无 法再连接另一个核苷酸，导 致 DNA 链合成在这里终止。 结果每一个反应管中都合成 一系列