原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
实验9 细胞核与线粒体的分级分离 实验原理 悬浮液中颗粒或分子的沉降速度取决于： ①离心力（g）：离心力越大，颗粒沉降越快 ②颗粒的大小和密度： 沉降速度与颗粒的质量、密度、形状、大小、以及与周围溶剂间的吸附力有关。 ③介质（溶剂）的密度和粘度： 介质密度越小，粘度越低，颗粒沉降越快。 离心分离方法 速度离心：根据被分离物质的体积差异 （1）差速离心；（2）移动区带离心 等密度离心：根据被分离物质的密度差异 三、实验报告 在光镜或油镜下观察和绘画出制备的细胞核与线粒体，并分析操作中成功和失败的原因。 匀浆(Homogenization)：低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25M蔗糖/3mM CaCl2)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 分级分离(Fractionation)：由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。 * * 实验目的：了解差速离心法分离细胞器的原理，掌握差速离心法分离哺乳动物的细胞核与线粒体的技术。 利用细胞内各组分在一定介质中沉降速度的差异，通过离心方法将各组分逐级分离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质(0.25M蔗糖/3mM CaCl2)中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。 取材： 每组1g肝组织 剪碎：用预冷的生理盐水洗3次 匀浆：1ml 匀浆（冰浴）＋ 2ml 冲洗 过滤：用3层纱布（匀浆液预湿）过滤 每人取0.5ml至EP管 离心：2500g，15’ 2500g离心15’ 纯化：沉淀加1ml冷匀浆液重悬 上清液(合并)转移至新EP管 离心：2500g，15’ 涂片：沉淀留0.1ml液体重悬，涂片。 染色：Gimsa扣染5－8分钟，水洗镜检 离心：17000g 20’ 沉淀加1ml重悬 离心：17000g， 20’ 沉淀留0.1ml液体重悬 上清2 上清1 各取一滴制片，用0.02％詹纳斯绿B染20’，镜检
文档评论（0）