烟草愈伤组织诱导与器官分化.docVIP

烟草愈伤组织诱导与植株再生 房雪菲（2008304201229）, 周荣华（2008304201208）(生技0802) 摘要 细胞全能性学说认为，植物的细胞具有发育为胚胎和植株的潜能。换句话说，细胞全能性是指植物细胞具有全套遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下仍能进行表达，而产生一个独立完整的个体。因此我们把细胞全能性学说看作是细胞工程的理论基础[1] 。本实验以烟草为实验材料，采用组织培养的方法，在添加BA和NAA各2.0mg/L的MS培养基上诱导小块的烟草叶片愈伤组织的发生， 2周后，将愈伤组织转到MS + BA 2.0 mg/ L+ NAA 0.5mg/ L培养基中光照培养,三周后，观察到幼芽的形成。 关键词：烟草；愈伤组织；全能性 Tobacco callus induction and plant regeneration Abstract In cell totipotency，cells of plant have the potential to develop into embryos and plants．In other words，cell totipotency refers to plant cells have its whole genetic information ，neither gengmtive cell nor somatoplasm，in given conditions，can express and grow into all intact plant．So plant cell totipotency is the fundanlental basis for cell engineering．In this experiment,we take tobacco as experimental material. Using tissue culture methods,that induce the occurence of tobacco leaves callus in the MS medium with BA(2mg/L)and NAA(2mg/L).Two weeks later,we transfer the callus to the new MS medium with BA(2mg/L)and NAA(0.5mg/L).Useing light training.three weeks later ,bud formation was observed. Key words: tobacco callus totipotency 1．前言 植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。它是指在无菌条件下，将离体的植物器官（根﹑茎﹑叶﹑花﹑果实等），组织（形成层﹑花药组织﹑胚乳﹑皮层等），细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整植株，统称为植物组织培养［２－４］。该技术以德国著名的植物学家G.Haberlandt提出的全能性学说为基础，即作为高等植物器官和组织基本单位的细胞，有可能在离体条件下实现分裂和分化，乃至形成胚胎和植株 [5] 。 30年代，美国植物生理学家White用番茄根组织离体培养获得成功，建立了活跃的无性繁殖系，并能进行继代培养。Gautheret和Nobecourt用胡萝卜根组织离体培养，经过脱分化产生了大量的愈伤组织，并再分裂形成完整的植株。50年代末，Steward等和Reinert几乎同时在胡萝卜根组织单细胞悬浮培养中发现某些体细胞在形态上转变为合子胚相似的结构，其发育过程也与合子胚类似，但由于它是由体细胞分化而来的，因而称为体细胞胚，这一重大的突破更进一步验证了细胞的全能性 [1]。随后，关于植物全能性的学说在各类的植物中不断得到验证，　植物通过体细胞胚胎发生途径形成再生植株已是及其普遍的现象 [6]。 烟草 (Nicotiana)原产于南美洲和澳大利亚，是植物组织培养的四大典型实验植物（烟草、矮牵牛、胡萝卜、芸苔）之一，也是一种重要的经济作物，在国民经济发展中起着重要的作用。从50年代初Skoog 和崔澄等以烟草离体根、茎、叶等进行培养开始，烟草的体外培养研究已有50多年的历史 [7]。 目前，通过烟草的花药培养[7]，原生质体培养[8]，以及烟草叶组织培养[9]已经成功获得烟草的体外再生植株。本实验以烟草叶片作为外植体，通过对其进行诱导培养，通过实验发现，光照可以使愈伤组织能够被更好的诱导；而不同来源（光照或黑暗）的愈伤组织对其的器官分化没有明显的影响。 ２．材料与方法 ２．１材料 材料 烟草无菌植株 试剂 MS培养基成分物质