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soft agar assay protocol软琼脂克隆形成实验 精品文档 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 软琼脂克隆形成实验 配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃水浴中，使其保持融化状态。 配含20%FBS、2×抗生素的2×RPMI 1640培养基，37℃预热。 灌下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔3ml，室温放置待其凝固。 等待下层胶凝固过程中消化B16 con shRNA与B16 Myo7a shRNA稳转细胞，计数，用无血清培养基调整浓度为5×104/ml，每孔用100μl细胞，设3个平行孔。 下层胶凝固后灌上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合(温度约40℃左右)，加入100μl细胞悬液，即5000个细胞，混匀，加入孔板中，每孔3ml。 37℃ 5% CO2培养，约2-3周收细胞，0.1%结晶紫染色，计数并比较两组克隆形成情况。