基因工程 第七章 酵母基因表达体系55P.pptVIP

酵母菌的转化系统 转化质粒在酵母细胞中的命运 酵母菌的转化程序 用于转化子筛选的标记基因 31 酵母菌的转化程序 酵母菌原生质体转化法 早期酵母菌的转化都采用在等渗缓冲液中稳 定的原生质球转化法。在 Ca 2+ 和 PEG 的存在下， 转化细胞可达存活的原生质球总数的 1%-5% 。但 是操作周期长，而且转化效率受到原生质再生率 的严重制约。 原生质转化法德一个显著特点是，一个受体 细胞可同时接纳多个质粒分子，而且这种共转化 的原生质占转化子总数的 25%-33% 。 32 酵母菌的转化程序 碱金属离子介导的酵母菌完整细胞的转化 酿酒酵母的碱金属细胞经碱金属离子（如 Li + 等）、 PEG 热休 克处理后，也可高效吸收质粒 DNA ，而且具有以下特性： ? 吸收吸收线性 DNA 的能力明显大于环状 DNA ，二者相差 80 倍。 ? 共转化现象较为罕见。 33 酵母菌的转化程序 酵母菌电击转化 ? 酵母菌原生质体和完整细胞均可在电击条件下吸收质粒 DNA ，但在此过程中应避免使用 PEG ，它对受电击的细胞 具有较大的负作用。其优势在于不依赖于受体细胞的遗传 特征及培养条件适用范围广，而且转化率高达 10 5 转化子 /μgDNA。 34 转化质粒在酵母细胞中的命运 ? 单双链 DNA 均可高效转化酵母菌，但单链 DNA 的转化率 是双链的 10-30 倍 ? 含有酵母复制子的单