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质粒DNA的小量酶切反应  实验原理 限制性核酸内切酶( restriction endonuclease):识别并切 割特异的双链NA序列的一种内切核酸蘸。限制性内切酶 能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列 之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三 类:I类、Ⅱ类、Ⅲ类。 I类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化) 作用且依赖于ATP的存在。I类酶结合于识别位点并随机的 切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割 DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成:一种为限 制性内切核酸酶  实验原理 Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们 是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6 个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如 ECoR I识别六个核 苷酸序列:5 GLAATTO3),有少数酶识别更长的序列或简并 序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割, 产生平末端的DNA片段。有的切割位点在对称轴一侧,产生 带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端  Sma I 5-CCC GGG-3 3-GGGICCC-5 平末端 EcoR I 5-G AATTC-3 3-CTTAA G-5 粘性末端  实验材料 质粒DNA 限制性内切酶:PstI、 Ba