液相色谱培训二：理论基础3教学案例.ppt

液相色谱培训 二、理论基础 1、基本概念 2、基本参数 1、基本概念 1.1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 1.2、基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 1.3、噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 1、基本概念 1.6、拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。 1.7、峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。 1.8、峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。 1.9、峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。 1、基本概念 1.10、半峰宽（peak width at half-height， Wh/2)-峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ 1.11、标准偏差（standard deviation，σ)-正 态分布曲线x＝±1 时（拐点）的峰宽之半 。正常峰的拐点在峰高的0.607 倍处。标准 偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的 分散程度。σ 小，分散程度小、极点浓度高 、峰形瘦、柱效高；反之，σ 大，峰形胖、 柱效低。 2、基本参数 2.1、定性参数（保留值） 2.1.1、死时间(dead time，t0)--不保留组分的 保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的 时间。 2.1.2、死体积(dead volume，V0)--由进样器 进样口到检测器流动池未被固定相所占据的 空间。 2、基本参数 2.1.3、保留时间(retention time，tR)--从进样 开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时 间。 2.1.4、保留体积(retention volume，VR)--从 进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时 流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝ F×tR 2、基本参数 2.2、柱效参数 2.2.1、理论塔板数(theoretical plate number， N)--用于定量表示色谱柱的分离效率（简称 柱效）。 N 取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径 分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类 和流速及测定柱效所用物质的性质。 2、基本参数 N 与柱长成正比，柱越长，N 越大。用N 表 示柱效时应注明柱长，如果未注明，则表示 柱长为1 米时的理论塔板数。（一般HPLC 柱的N 在1000 以上。） 2.2.2、理论塔板高度(theoretical plate height ，H)--每单位柱长的方差。实际应用时往往 用柱长L 和理论塔板数计算。 2、基本参数 2.3、相平衡参数 2.3.1、分配系数(distribution coefficientK)— 在一定温度下，化合物在两相间达到分配平 衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。 随着浓度的增大，K 减小，这时色谱峰为拖 尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K 也增大 ，这时色谱峰为前延峰。 在同一色谱条件下，样品中K 值大的组分在 2、基本参数 固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K值 小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。 混合物中各组分的分配系数相差越大，越容 易分离。 在HPLC 中，固定相确定后，K 主要受流动 相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的 组成配比及pH 值，以获得组分间的分配系 数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的 2、基本参数 2.3.2、容量因子(capacity factor，k)--化合物 在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动 相中的量之比。因此容量因子也称质量分配 系数。 容量因子的物理意义：表示一个组分在固定 相中停留的时间（tR）是不保留组分保留时 间（t0）的几倍。k＝0 时，化合物全部存在 于流动相中，在固定相中不保留，tR＝0；k 2、基本参数 越大，说明固定相对此组分的容量越大，出 柱慢，保留时间越长。 容量因子与分配系数的不同点是：K 取决于 组分、流动相、固定相的性质及温度，而与 体积Vs、Vm 无关；k 除了与性质及温度有 关外，还与Vs、Vm 有关。由于tR、t0 较Vs Vm 易于测定，所以容量因子比分配系数应 用更广泛。 *