2019年8高效毛细管电泳仪.pptVIP

毛细管电泳中，离子迁移的顺序 V 总 = V + V EOF ? 正离子 ：电泳方向与电渗流方相同， 最先流出 ； ? 中性粒子 ：电泳速度为零，随电渗流流出。 ? 负离子： 电泳方向 与电渗流方向相反 ； VV EOF ，无法流出 VV EOF ，在中性粒子后流出 + - - N N N N N N N EOF 都是从负极流出 ２．毛细管电泳仪系统 电泳仪 进样系统 分离系统 检测 系统 数据处理系统 高效毛细管电泳仪 （ high performance capillary electrophoresis, HPCE ） 主要内容 ? 电泳的基本原理 ? 电泳的影响因素 ? 毛细管电泳的基本结构 ? 毛细管电泳的分离模式 ? 毛细管电泳的临床应用 一、电泳的定义 ? 电泳（ electrophoresis ， EP ） 是指带电荷 的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电 荷相反的电极移动的现象。 ? 利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技 术 叫 做 电 泳 技 术 （ electrophoresis technique ） 二、电泳发展简史 ? 1 、 1937 年 瑞典科学家 A. Tiselius 首先提出的，后 来． A. Tiselius 又和他的同 事们一起第一次从人的血清 中分离出白蛋白、 α 球蛋白、 β 球蛋白、 γ 球蛋白，由于 A. Tiselius 对电泳技木发展 和应用的杰出贡献，使他成 为 1948 年诺贝尔化学奖的得 主 ． ? 2 、 1948 年 Wieland 和 Fischer 重新发展了以 滤纸作为支持介质的电泳方法，对氨基酸的 分离进行过研究。 ? 3 、 1959 年 Raymond 和 Weintraub 利用人工 合成的凝胶作为支持介质，创建了聚丙烯酰 胺凝胶电泳，极大地提高了电泳技术的分辨 率，开创了近代电泳的新时代。 ? 4 、 1967 年 Hjerten 最先提出在高电场强度， 直径为 3mm 的毛细管中作自由溶液的区带电 泳 (CZE,capillary zone electrophoresis) 。 三、电泳原理 ? 物质分子在正常情况下一般不带电，即所带 正 负 电 荷 量 相 等 故 不 显 示 带 电 性 。 但 是 在 一 定 的 物 理 作 用 或 化 学 反 应 条 件 下 ， 某 些 物 质 分 子 会 成 为 带 电 的 离 子 （ 或 粒 子 ） ， 不 同 的 物 质 ， 由 于 其 带 电 性 质 、 颗 粒 形 状 和 大 小 不 同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速 度也不同，因此可使它们分离。 电泳原理 若将带净电荷 Q 的粒子放入电场，则该粒子所受 到的电荷引力为： F 引 =E Q （ 6-1 ） 在溶液中 , 运动粒子与溶液之间存在阻力 F 阻 F 阻 =6πrηV （ 6-2 ） 当 F 引 =F 阻 时 EQ= 6πrηV V = EQ/6πrη （ 6-3 ） 由上式可以看出 , 粒子的移动速度 ( 泳动速度 V) 与电 场强度 (E) 和粒子所带电荷量 (Q) 成正比 , 而与粒子的半 径 (r) 及溶液的粘度 (η) 成反比。 电泳原理 ? 电泳迁移率 （ Electrophoreticmobility, μ ），表 示单位电场下带电粒子的运动速度。 μ e = v /E μ e =q/6πηr ? 对于一定的荷电粒子或离子，电泳迁移率是该粒子的特征 常数。颗粒带净电荷量越大或其直径越小，其形状越接近 球形，在电场中泳动的越快；反之，则越慢。 ? 设 d 为粒子电泳移动距离， t 为电泳时间，则 ? 电场强度 E 为单位距离内的电位差（ ），设 L 为两 极间的距离，即 t d v / ? L U E / ? ? U ? ? 合并上面两式： ? 设有 A 和 B 两种带电粒子，它们能否在电场中电泳分