2019年抗原抗体反应的应用.ppt

② 间接法 ③ 捕获法（反向间接法） ? 主要用于血清中某种抗体亚型成分（如 IgM ）的测定。 ④直接法 用酶标记的抗原 或抗体直接检测 包被在酶标板上 的抗体或抗原， 其量与产物颜色 成正比。 3 、均相酶免疫吸附测定 基本原理：利用酶标抗体结合抗原形成复 合物后，标记酶的活性发生改变的原理， 在不将复合物与游离酶标抗体分离的情 况下，直接测定系统中总的标记酶活性 的改变，进而推算出待检样品中的抗原 量。 主要用于 小分子抗原 或 半抗原 的检测 . 酶放大免疫测定技术 : （ enzyme-multiplied immunoassay technique ， EMIT ） ? 基本原理 : 半抗原与酶结合成酶标半抗原，保 留半抗原和酶的活性。当酶标半抗原与抗体结 合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性 中心受影响而活性被抑制。 ⑤ 斑点酶免疫试验 (dot-ELISA) 3. 荧光与发光免疫分析 ? 概念：以荧光素作为示踪物，通过荧光 显微镜观察进行定位检测。 ? 荧光化合物：异硫氰荧光素、罗丹明荧 光素。 ? 基本原理 利用荧光素标记抗体，使之在涂片上 或组织切片上与标本中的待检抗原特异 结合，采用高发光效率的点光源，透过 滤色板发出一定波长的光，使结合在标 本上的荧光素被激发而产生荧光，借助 荧光显微镜观察底物片上荧光染色形态， 来判断有无待检抗原或抗体。 荧光免疫测定技术 —— 时间分辨荧光免疫分析法 ? 原理：稀土铕离子 Eu 3+ 螯合物标记抗体 后，抗体与固相抗原结合，抗体上的 Eu 3+ 在紫外光（ 340nm ）激发下，与增 强液中的 β - 二酮体重新形成一种微胶体 螯合物，发出长寿命的高强度荧光 （ 613nm ），比未激发时增强了 100 万倍， 可用时间分辩荧光计记录。 Eu Eu Eu Eu Eu 发射高强度荧光 时间分辩荧 光计记录 加入增强液 紫外光激发 （ 340nm ） 时间分辨荧光免疫分析原理 直接法 间接法 夹心法 间接夹心法 第三节 抗原抗体反应的应用 一、免疫沉淀与免疫凝集 二、免疫标记 三、免疫定位分析 四、抗原抗体反映的其他应用 一、免疫沉淀与免疫凝集 1. 溶液中的环状沉淀试验 ? 在体外可溶性抗原与相应抗体形成肉眼 看见的沉淀物。 ? 在液相中形成的沉淀不容易观察判断， 利用抗原和抗体溶液之间的界面形成的 沉淀线便于观察。 对照 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 抗血清稀释度 抗原 沉淀线 抗血清 环状沉淀实验示意图 2. 凝胶扩散沉淀 ? 抗原抗体在半透明的半固相介质中进行沉淀实验。 抗原分子与抗体分子在凝胶介质中自由扩散，相 遇形成沉淀。 ? 以琼脂扩散实验较为常用。 1) 单向免疫扩散：抗体混于琼脂中，小孔中加入抗 原，抗原向周围均匀扩散，与抗体形成沉淀环。 可用于定量测定免疫球蛋白和补体的含量等。 2) 双向免疫扩散：抗原和抗体向周围扩散后可在两 孔之间形成白色沉淀线，可用于抗原或抗体的定 性检测。 ? 缺点：时间长，灵敏度低 。 单向免疫扩散：常用于测定 IgG 、 IgM 、 IgA 、 C3 、 C4 等。 抗体混于琼脂 凝胶中制板 沉淀环 环的直径与抗原 含量成正相关 ? 双向免疫扩散 —— 沉淀线形状的变化显示抗原间是否 存在共同的抗原决定簇 。 Ab Ag1 ， 3 Ab Ab 3. 电泳条件下的沉淀反应 1) 血清免疫电泳：患者血清和正常人血清分别 放在凝胶上近负极端的小孔中进行电泳分离 后，在两种抗原之间沿电泳方向挖一平行的 小槽，加入抗血清进行双扩散。 2) 火箭电泳：单向免疫扩散与电泳结合的一种 方法。在电场作用下抗原向正极扩散，与抗 体形成沉淀峰（火箭型沉淀线）。需时短， 能检测微量抗原。 3) 对流电泳 ( 电渗析 ) ：在电场作用下抗原与抗 体相对扩散，形成沉淀线。对流电泳较双扩 快速和灵敏。 4. 免疫共沉淀 在溶液中两种或两种以上蛋白质相互 作用，可以通过免疫共沉淀惊醒鉴定和分 离。 蛋白质相互作用通过非共价结合，用 针对其中一种蛋白质的特异性抗体进行的 免疫沉淀，与该蛋白相互作用的其他蛋白 也同时被沉淀下来。 如果第一抗体结合后再加入第二抗体 或