Lab1培养基的配制与灭菌.pptVIP

2 Sterilization – destruction of all forms of microbial life, including endospores . Physical Methods — Moist heat Autoclaving ? Action - protein denaturation . ? Very effective method of sterilization; at about 15 psi （ Ib/in 2 ） of pressure (121 o C [ 250 o F]), all vegetative cells and their endospores are killed in about 15 min . — Dry heat Direct flaming ? example: Inoculation loop Hot-air sterilization ? Baking in oven ? Very effective method of sterilization, but requires temperature of 170 o C [ 340 o F]for about 2 hr. — Filtration ? – Separation of bacteria from suspending liquid. ? – Removes microbes by passage of a liquid or gas through a screen like material. Most filters consist of diatomaceous earth, cellulose acetate or nitrocellulose. ? – 0.45 ? m filters removes most bacteria, ? 0.20 ? m more inclusive, viruses need 0.01 ? m. ? – Useful for sterilizing liquids (enzymes, vaccines) that are destroyed by heat. 三 实验材料与器材 ? 培养基：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、 葡萄糖、孟加拉红、链霉素、 1 mol/L NaOH 、 1 mol/L HCl 、 KNO 3 、 K 2 HPO4· 3H 2 O MgSO 4 · 7H 2 O FeSO 4 · 7H 2 O. ? 器材：玻璃器皿、天平、 pH 试纸、灭菌锅等 四 操作步骤 称量 → 溶解 → 调 pH *→ （过滤 * ） → 分装 *→ 加塞 *→ 包扎 → 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌灭菌操作步骤 ? 首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量 的水，使水面与三角搁架相平为宜。 ? 放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤， 以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口 端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入 棉塞。 ? 加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽 内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使 螺栓松紧一致，勿使漏气。 ? 开启电源加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除 锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让 锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升 到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实 验用 1.05 kg/ cm 2 ， 121.3 ℃， 20 min 灭菌。 ? 灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温 度自然下降，当压力表的压力降至 0 时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如 果压力未降到 0 时，打开排气阀，就会因锅内压 力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不 平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养 基而发生污染。 ? 将取出的灭菌培养基放入 37 ℃温箱培养 24 h ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。