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HPLC高效液相色谱仪标准操作 设备型号：Waters e2695 1 仪器组成 本仪器由Waters e2695分离单元、Empowerse色谱工作站和打印机组成。2695分离单元包括四元梯度洗脱溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳12个样品瓶自动进样系统。 2 2020-7-26 HPLC流程原理图 3 2020-7-26 开机前的准备工作 检查设备电源、电路、信号连接是否完好。 连接好需要的色谱柱。 流动相：根据待检样品的检测方法配制相应的流动相，必须用0.45um微孔滤膜抽真空过滤。使用色谱纯的溶剂。水和缓冲液都需要用超纯水；盛放溶剂和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。 4 2020-7-26 基本操作 开机 单机版：先打开电脑，依次接通2695分离单元，检测器和打印机电源 企业版：先打开服务器，服务器开启成功后打开LACE，LACE开启后依次打开客户端，接通2695分离单元/Waters600型泵，检测器和打印机电源。 注：待机后系统进行自检，在此期间，不应进行任何操作，否则易造成仪器自检失败 5 2020-7-26 系统前处理 脱气（Degassger）:按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degassger→Mode”,按Enter选择“On”,打开在线脱气。 灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）:在主屏幕下，按：“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Seal Wash”屏幕，按“Start”直接清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt→Close”。 Status（1）界面 主屏幕界面 6 2020-7-26 系统前处理 灌注针头清洗泵（Prime Needle Wash）：在屏幕下按“Diag”,显示“Diagnosties”屏幕，按“Start”，应见溶剂从废液排放口流出，运行结束后按“Close”；若想多洗几次时，按“Start Again”。 湿灌注（Wet Prime）：按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，在“Composition”页面中选择将用到的溶剂通道改为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，点击“OK”。流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min,3ml/min）,设定完成点击“OK”即可。将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次（也可各通道选25%进行灌注）。 7 2020-7-26 系统前处理 冲洗进样器（Purge Injector）：在“Compostion”界面中设定适当的溶剂比例（方法中梯度的初始比例），按“Direct Function”键，选择“Purge Injector”,点击“OK”，默认数值为6 ，点击“OK”运行。 *特别注意* 系统前处理过程在每次开机后依次进行，若发现注射器中有气泡，可重复操作，直至气泡排净为止。 8 2020-7-26 建立项目、编辑仪器方法和方法组 打开客户端后，输入用户名和密码进入操作界面后，双击桌面上Empower图标，出现Login对话框，输入用户名和密码点击“OK”进入工作。 建立项目：点击Empower软件界面中的“Configure the System”，点击“File→New→Project”,进入“New Project Wizard→New Project Parent”界面选择需要创建的项目位置，点击“Next”到“New Project Wizard-Tablespace”界面，Table Space的大小应为150-200MB，点击Next到“New Project Wizard-Options”界面，点击Next到“New Project Wizard-Access Control”界面，在“Allowed Access”中选择适当的权限，在“Allowed Access to Group”中选择适当的组，点击Next到“New Project Wizard-Copy Selection”界面选择需要复制的项目和内容，点击Next到“New Project Wizard-Name Entry”界面，输入项目名称点击“Finish”即可创建新的项目。 9 2020-7-26 建立项目、编辑仪器方法和方法组 编辑仪器方法：点击Empower界面中的“Browse Projects”选择需要打开的项目点击“OK”，进入到“Run Sample”，选择需要进入的系统点击“OK”，进入到“Run Samp