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生物选修三易考知识点背诵 专题 1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特 ，创造出更符合人们需 要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA 分子水平上进行 设计和施工的，又叫做 DNA 重组技术。 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能： 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一 条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专 一 。 （3）结果： 经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端 和平末端。 1 EcoRI 限制酶的切割产生黏性末端，SmaI 限制酶的切割产生平 末端。 2.“分子缝合针”——DNA 接酶 (1)两种 DNA 接酶（E·coliDNA 接酶和 T4-DNA 接酶）的比 较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别： E·coliDNA 接酶来源于大肠杆菌，只能将双链 DNA 片段互补 的黏性末端之间的磷酸二酯键 接起来；而 T DNA 接酶能缝合两种 4 末端，但 接平末端的之间的效率较低。 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同： DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形 成磷酸二酯键。DNA 接酶是 接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸 二酯键。 3.“分子运输车”——运载体 （1）载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。 2 ③具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于 细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。 （3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。 (二)基因工程的基本操作程序 第一步： 目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2.原核基因采取直接分离获得，从自然界已有的物种中分离，如 从基因文库中获取。真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常 用方法有反转录法_和化学合成法_ 。 3.PCR 技术扩增目的基因 （1）原理：DNA 双链复制 （2）过程： 第 1 步：加热至 90～95℃DNA 解链 ； 第 2 步：冷却到 55～60℃，引物结合到互补 DNA 链 ； 第 3 步：加热至 70～75℃，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链 的合成。 第二步 ：基因表达载体的构建 3 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一 代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成： 目的基因＋启动子＋终止子 ＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首端， 是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA，最终 获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，