原位杂交技术理及其的应用.ppt

原位杂交技术 in situ hybridization  核酸分子杂交技术 ◇在研究DNA分子复制原理的基础上发展起 来的一种技术。两条核苷酸单链片段,通 过氢键结合,形成 DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA_RNA双链分子 ◇按其作用方式可大致分为两种:固相杂交 和液相杂交 ◇液相杂交是指参加反应的两条核酸链都游 离在溶液中。液相分子杂交技术包括吸附 杂交、发光液相杂交、液相夹心杂交和复 性速率液相分子杂交等  ◇固相杂交是将参加反应的一条核酸链固定在 固体的支持物上(常用的有硝酸纤维素滤膜, 其它如尼龙膜、乳胶颗粒和微孔板等),另 条参加反应的核酸链游离在溶液中。固相 杂交包括 ◇菌落原位杂交( co lony in situ hybr idization)、 心斑点杂交( Dot blot) 今 Southern印迹杂交( Southern blot) 心 Nor thern印迹杂交( Nor thern blot) 今组织原位杂交( Tissue in situ hybr idizat ion) 即原位杂交组织化学技术和原位杂交免疫细胞化学 技术  原位杂交技术的基本原理 今利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过 碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区 形成杂交的双链 1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键 结合,形成DNA_DNA、DNA_RNA或 RNA-RNA双键分 子 2.应用带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、 32P,荧光素、生物素、地高辛等非放射性物 质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细 胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交 3.用放射自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观 察目的mRNA或DNA的存在与定位  CG C-DNA Vector Transcription sP6 T7 T3 polymerase D:9命xi他i Biotin PAP GCU GC C-RNA UCG m-RNA