重组人白细胞介素8在大肠杆菌的表达、鉴定.pdfVIP

重组人白细胞介素 8 在大肠杆菌的表达、鉴定 1 [1] 【摘要】 目的：利用PCR 技术 扩增 hIL-8 cDNA ，将其与酶切后 的原核表达载体 pKpL3a （含PL 启动子）质粒连接，并在大肠杆菌中进 行表达、鉴定。方法 ：PCR 技术扩增 hIL-8 cDNA 获取目的基因，大肠 杆菌质粒提取，将目的基因连接到大肠杆菌表达载体 pKpL3a 质粒中， 重组 DNA 分子转化到 Pop2136 大肠杆菌中，利用其所 生的温度敏 感性λ 阻遏蛋白来调控外源基因表达，经ELISA 反应检测其表达水平。 结果：带hIL-8 基因的重组pKpL3a 质粒成功转化到 Pop2136 大肠杆菌 中，经诱导，表达了 IL-8 经 ELISA 反应检测了其表达水平。结论 ： hIL-8 成功在大肠杆菌中表达。 【关键词】hIL-8 ， PCR ，重组 DNA 2 【 Summary】 Purpose ： Connecting the hIL-8 cDNA which is amplificated using PCR technology with the plasmid of prokaryotic expression vector digested pKpL3a (including PL promoter),and detecting the expression and identification of recombinant hIL-8 in E.coli。 Method ： Get target gene by amplificating hIL-8 cDNA using PCR technology. Extract the E.coli plasmid. Connect the target gene with E.coli plasmid pKpL3a expression vector. Transform recombination 3 DNA into E.coli Pop2136, and regulate gene expression of exogenous using the temperature-sensitive λ repressor protein, then detect the expression levels by ELISA reaction。 Result ： Recombinant plasmid PKpL3a with hIL-8 gene is successfully transformed into E.coli Pop2136 and expresses IL-8.The expression level of the IL-8 is detected by ELISA reaction.Conclusion ：hIL-8 is successfully expressed in E. coli. 【Keywords】hIL-8 ， PCR ，Recombination DNA 白细胞介素 8 （Interleukin-8）是一种具有趋化作用的细胞因子，对 中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和 T 细胞具有区划作用，并可促进中性粒 细胞的活化，在炎症反应中是一种重要的炎症因子。另外，IL-8 还具 有促进造血细胞增殖及新生血管生成作用，在伤口愈合和肿瘤生长及 转移的过程中发挥重要作用。 天然来源的 IL-8 含量极低，难以大批量制备，因而只能利用基因