染色体制片方法及染整技术培训教材.docVIP

PAGE PAGE 28 |首页|课程申报书|教学大纲|授课教案|参考书目|网络课程|习题|教学录像|发表论文|资源库| (六)植物细胞有丝分裂 一、实验目的 (1) 学习和掌握植物根尖细胞压片技术。 (2) 观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。 二、实验原理 有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内的染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样。从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关，支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。 高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。通过对根尖的固定、染色和压片，可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体，看到染色体的变化特点和染色体的形态特征，进行染色体计数。为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冷冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期，同时还可以使染色体缩短，易于分散，便于观察研究。另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层，并使细胞软化，便于细胞彼此分开，有利于压片和染色。 三、实验材料 小麦 ( Triticum Spp ． ) 、玉米 ( Zea mays ) 、大蒜 ( Aillumsativum ) 、洋葱 (Aillum cepa ) 、蚕豆 (Vicia faba ) 等。 四、实验器具和药品 1 ．器具 冰箱，恒温箱，显微镜，水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等。 2 ．药品 无水酒精、 95 ％酒精、 70 ％酒精、 45 ％酒精、 0.5 ％醋酸洋红、 0.5 ％苏木精液、 4 ％铁明矾液、苯酚，亚硫酸、二甲苯、秋水仙素、对二氯苯、 8- 羟基喹啉、α－溴萘、 lmol/L 盐酸、 25 ％纤维素酶和 2.5 ％果胶酶混合液、加拿大树胶等。 五、实验步骤 1 ．培养 (1) 大蒜和洋葱根尖：将大蒜或洋葱置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，然后转移到 25 -28 ℃ 的条件下培养．待根尖长到 2cm 左右时，在上午 9 － 10 时剪去根尖约 lcm 备用。 (2) 玉米或小麦，蚕豆根尖：用温水将蚕豆种子浸种 2 天，玉米及小麦种子浸种 1 天，侍吸水膨胀后转移到铺有几层吸水纸的培养皿或塘磁盘中，上面盖双层湿纱布并加入少许水，放在 25 -28 ℃ 条件下培养．待根尖长到 2cm 左右时．在上午 9 一 l0 时或下午 3-5 时取下根尖备用。 2 ．预处理 为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应对剪下的根尖进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成．促使染色体缩短和分散。预处理的方法有低温预处理和药物预处理。 (1) 低温预处理：将剪取的根尖浸入盛有蒸馏水的烧杯内，置于 4 ℃ 的冰箱中进行低温处理 24 小时。此法效果很好。对染色体无破坏作用，染色体缩短均匀．简便易行，各种作物都适用。 (2 ) 药物预处理：常用药物有秋水仙素溶液、对二氯苯溶液、 8 —羟基喹啉等。 3 ．固定 借助于物理方法或化学药物的作用，迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能保持生活时的完整和真实状态。固定时，将预处理过的根尖用蒸馏水冲洗两次 ( 约 5 分钟 ) 。然后移入卡诺氏固定液中，在 4 — 15 ℃ 条件下固定 20 一 24 小时后用 70 ％酒精冲洗 2 次转入 70 ％酒精中．在 4 ℃ 冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月．经过较长时间保存的材料，进行观察前可以换用固定液再处理一次效果较好。或将预处理过的根尖放入 0.075mol/L KCI 溶液中低渗 20 分钟．然后在蒸馏水中冲洗 2 — 3 次 ( 约 10 分钟 ) 待用。 4 ．解离 使分生组织细胞间的果胶质分解．细胞壁软化或部分分解．使细胞和染色体容易分散压平。解离有酸解和酶解两种方法： (1) 酸解：将根尖从固定液中取出，用蒸馏水漂洗．然后放入已经在 60 ℃ 水浴锅中预热的 1 mol/L HCI 中，在 60 ℃ 恒温条件下解