免疫组化实验结果的判定和分析.pdfVIP

精品文档 免疫组化实验结果的判定和分析 免疫组化实验结果的判定和分析 就实验结果而言， 免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、 图片的确定与选 取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。 只有严格的实验设计、标准的 实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。 免疫组化结果的判定原则： ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。 如 LCA应定位在细胞膜上； CK应定位在细胞浆内； PCNA及 p53 蛋白应定位在细胞核内； EMA应定位在细胞膜上等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概 不能视为阳性。 ⒊阴性结果不能视为抗原不表达。 由于检测方法灵敏度有高低之分， 有时可因染色方法灵敏 度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。 ⒋尽量避开出血、 坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达， 特别是酶免疫标记。 因为这 类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。 ⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、 X 线等影像学及实验结果综合 分析。 对照染色设计： ( 一）对照染色的目的 设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三种： ① 组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽； ② 抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）； ③ 染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液 pH 和离子强度不当等。 假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有： ① 自发荧光或内源酶等干扰； ② 抗体试剂不纯 ( 特别是一抗）； ③ 操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等； ④ Fc 受体的干扰，等等。 （二）对照的种类及其选用目的 对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。 ⒈阳性组织对照 指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处 理和免疫染色的组织对照。 正确的结果应呈现阳性， 目的是为了证实所用免疫组化染色流程 的有效性，排除假阴性的可能。 ⒉阴性组织对照 指用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照。 正确的结果应为阴性， 目的 是除外假阳性。 ⒊阴性试剂对照 是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂， 尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而所设 立的同步免疫染色对照，包括有：空白对照、替代对照、吸收试验和抑制试验等。目的在于 除外假阳性和证实所用免疫组化试剂及其技术方法的有效性和待检实验切片免疫标记阳性 结果的可靠性。 ⑴ 空白对照 。 1 欢迎下载 精品文档 指以缓冲液（ PBS、TBS等）取代第一抗体（主要的，必要时还可做第二抗体及桥联抗体的 空白取代），其他各步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。 ⑵ 取代对照 指以所用方法第一抗体同源动物的正常血清， 或与本实验无关的抗体 ( 靶生物缺如的 ) 取代第 一抗体，其他步骤不变的试剂对照染色，结果应为阴性。 ⑶ 吸收试验 是指用事先经过量抗原吸收的第一抗体上清液取代第一抗体， 其他步骤不变的免疫染色试剂 对照。结果应是阴性或阳性着色明显减弱（吸收不全时）。 ⑷ 抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗体 （可以是一抗，也可以是二抗或桥抗体） 两者的混合物作试剂， 其他步骤不变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳性着色应成比例的减弱（等量或